作者hahaiamweiwe (WiWi)
看板Biotech
标题[求救] 关於transfection前细胞处理问题
时间Thu May 3 21:49:22 2012
最近在做transfection的实验，要将miRNA送入细胞
我用的产品是QIAGEN的Hiperfect transfection reagent
http://ppt.cc/-h_l
按照protocol的前处理，细胞计数完种入6-well plate，(我的细胞是HCT116，贴附型
大肠癌细胞，之前养一阵子的经验，很耐，非常会长，平时都养在6mm dish)
隔天(18~24hr，我是22小时)transfection前2小时，换入新的DMEM，但是问题就
一直出现在这一步，我换了DMEM後，观察一下了细胞，恩，没事，於是我就去配置
transfection的试剂，30min後回去看，细胞漂了....我重复做了4,5次都一样，
我都是很小心的慢慢吸掉与加入DMEM，但发现漂的地方通常是加入DMEM的地方，
我已经用10s加1 ml的速度慢慢沿着壁加进去了说QQ
之前养的经验并不会这麽容易就漂，但如果多放几天细胞就会贴很紧，但我怕放
太多天对要transfection的细胞DATA有所影响。
1.请问为什麽之前用6mm dish养时贴很紧，现在用6-well就贴不紧?(6-well plate
换过两个厂牌都一样)
2.如果多放几天再transfection对DATA是否会有可信度的影响?
这问题困扰我很久了，6月要赶毕业这实验一直做不起来我快抓狂了...QQ
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.124.52.227
1F：→ blence:protocol并没说要换DMEM吧? 05/03 22:49
2F：推 joseph103331:为什麽要换medium? 05/03 22:50
3F：→ blence:如果认为60mm不会飘，那就直接拿一盘测试吧，免得一直浪费 05/03 22:53
4F：→ blence:6well,其实你这是culture问题而不是transfection 05/03 22:54
5F：推 Realthugz:通常mixture直接加进去吧 反应完後之後再换吧? 05/03 23:49
6F：→ hahaiamweiwe:我这里有拿到其他牌的reagent,上面是说要换新鲜的@@" 05/04 00:21
7F：→ hahaiamweiwe:所以一般不用换MEDIUM吗?因为我打去技术部他们都说要 05/04 00:22
8F：→ blence:用其他牌的reagent却给Q牌的http link,是给板友看心酸的吗? 05/04 00:26
9F：→ hahaiamweiwe:我都同时做的,只是顺便试试它牌,且客服也跟我说要换 05/04 00:29
10F：→ hahaiamweiwe:Q牌的客服给我的建议是换medium,但一直有问题 05/04 00:30
11F：推 vancent:TRANSFECTION前换MEDIUM是大忌... 05/04 10:56