作者abcm1042 (那就好)
看板Biotech
标题[求救] HIS蛋白在beads上下不来
时间Mon Apr 9 17:19:34 2012
想请问各位大大
我的蛋白最近都在Ni beads上 无法下来
我的wash buf 是用 50mM NaH2Po4 300mM NaCl 10mM imidazole
elution buf 50mMNaH2Po4 300mM NaCl 250mM imidazole
蛋白是由pet28b系统在BL21中产生的
之前都没有问题 但最近蛋白大都在beads上没有办法elute下来
imidazole浓度从250mM~500mM都试过
减少beads binding的时间 从之前的4度C o/n 室温30分钟
也还是很多蛋白在beads上
想请问我还可以用什麽方法得到elute的蛋白
因为我是需要看protein interaction 所以太破坏结合反应的方法可能不行
谢谢
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◆ From: 140.121.179.203
1F：推 mckendri:先试看看imidazole有没有坏掉吧 04/09 17:41