作者ChesterYeah (小叶)
看板Biotech
标题[求救] superoxide anion scavenging
时间Thu Feb 23 19:22:29 2012
参考Robak和Gryglewski (1988)
以 PBS 配制 60μM PMS phenazine methosulfate
468 μM 之 nicotainamide adenine dinucleotide (NADH)
150 μM之nitroblue tetrazolium (NBT)
然後取 250 μL sample (conc. 0.1~4 mg/ml)与等体积 PMS、NADH、NBT mix
避光静置 5 分钟再去测 560 nm
吸光值愈低表示其清除超氧阴离子能力愈强
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做了 3 组-
(1) backgroup
>怕样品背景值的影响
样品 + PBS = 无颜色
(2) NBT-sample reaction
>因为怕样品直接会与 NBT 反应
样品 + NBT + PBS = 无颜色 (非常微淡的 NBT 颜色)
(3) experimental group
>无言的结果.........
样品 + PMS + NADH + NBT = 瞬间颜色超深，剂量越高颜色越深 (紫色)
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问题来了....
这实验之前做了 DPPH 剂量跟清除力呈正比
做这个实验，剂量跟清除力呈反比
问题在於我做了两次
(1) 先加样品再加後续试剂= 结果显示剂量和清除力呈反比
(2) 於是换个方式，先加 PMS NADH NBT 最後加 样品= 结果一样....
(3) 很神奇的是...PMS + NADH 是产生 superoxide 让 NBT 产生反应 颜色变深
结果发现样品加下去的瞬间就让 mixture 颜色变深，随着浓度越高 颜色越深
高过 control... 超怪
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请问有神人遇过这种事情以及解决方法吗?
谢谢!
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