作者peggie0903 (dwz.tw/57pn)
看板Biotech
标题[求救] 真菌transform的方法
时间Tue Feb 21 12:41:04 2012
大家好 我最近在做Aspergillus的transformation
大致上是将孢子隔夜培养後
再用vino taste酵素处理两小时 去除细胞壁 得到protoplast
之後再用1.2M sucrose为底 上层放培养液去离心
理论上protoplast应该会出现在培养液跟蔗糖的介面
但是我就是无法看到那明显的分层.......
已经困扰很久了 拿不到protoplast的话就无法进行transform
可不可以请有经验的版友 提供我真菌transform的方法？
或是提供一些意见
感谢大家了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.116.72.196
1F：推 Ianthegood:一开始做gradient有分层吗?这不是有机喔 一开始没有 02/21 15:53
2F：→ Ianthegood:明显分层的话离完也不会有 02/21 15:53
3F：→ peggie0903:"一开始有分层" 是要先离心的意思吗? 02/21 17:13
我好像有点理解错误
以下是我follow的PAPER
We normally do this by layering the protoplasting mixture gently onto
a sterile 1.2 M sucrose cushion in a sterile, capped centrifuge tube (Sarstedt, cat. no. 62.547.004) and centrifuging at 1,800g
for 10 min at 4 °C in a swinging bucket rotor.
蔗糖应该只是在下面 不需要梯度的样子
※ 编辑: peggie0903 来自: 210.59.89.52 (02/21 18:20)
4F：→ Ianthegood:用针筒把sucrose很慢很慢很慢平顺的一口气放到最底 02/23 00:04
5F：→ Ianthegood:就会看到有一层漂亮的分界 02/23 00:04