作者rockerwei (才女)
看板Biotech
标题Re: [求救] 用旧的agarose gel跑RNA
时间Sat Nov 12 00:16:26 2011
※ 引述《pocession (阿宗)》之铭言:
: ※ 引述《rockerwei (才女)》之铭言:
: : 不过我们实验室也只有用DNA maker来看18s和28s是不是对的
: : DNA maker跑得很正常
: : (RNA有特别的maker吗?)
: : 我们的胶只是单纯放在一般的保鲜盒
: : buffer已经跑到都要不行了
: : 所以还是要用全新的胶全新的buffer来跑会比较好就对了
: : (因为实验室check PCR pruduct也都是用旧得胶旧的buffer跑~但band都很正常)
: : 因为在以前的实验室都是要跑才做胶所以RNA也都是正常的
: : (而且还有先denature处理过才跑,做的胶有外加ATA)
: : 所以不确定是因为跑旧胶的问题还是没有经过denature的处理
: : (现在的实验室有点穷,所以都没有处理RNA就直接跑了~)
: 嗯 可能我的意思让你有点误解
: 要跑RNA Marker的原因有两个
: 一个是DNA的分子量没有办法代表RNA (DNA为双股,RNA为单股,单体的分子量也不一样)
: 另一个是确保你在SAMPLE prepare或是跑胶的过程中RNA没有分解
: (如果跑胶的流程中出错,RNA marker就会分解了,以此作为判断)
: 所以你用DNA marker作比较,是没办法作任何判断的
: 另外,根据我的经验,胶的新鲜与否并不是很直接的影响
: 主要是跟你放置的容器和跑胶的buffer有很大的关系
: 容器要乾净,跑胶的buffer尽量灭过菌,然後要跑时再稀释(要用二次水),
: 如果要把RNA sample作变性处理
: 可以自己配制含formaldehyde的loading buffer就好了,满便宜的
: 如果不想买RNA marker,可以自己用acid phenol抽新鲜的大肠杆菌(养至对数期的细菌)
: 里面会有5S, 16S, 23S;可以帮助你判断位置和跑胶流程有没有发生问题
再求救一次~我这次已经用新的buffer跑了~可是还是没有18S和28S的band
我在想是不是配胶的问题
因为我是直接拿DNA的agarose gel来跑
请问大大们
有没有配RNA gel 的配方~~
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◆ From: 220.137.13.140
1F:推 f9361046:不是那个问题.. 11/12 01:04
2F:推 Realthugz:etbr gel要看到band是没问题的.... 11/12 09:10
3F:推 huuban:degrade掉了吗?有没有smear? 还是连smear都没有? 11/12 13:45
4F:→ huuban:请问你现在到底是怎麽跑胶的呢? 11/12 13:49
5F:→ huuban:是什麽样本?确定操作过程都OK吗? 11/12 13:51