各位好 最近要做虾红素抗氧化能力的检测 知道有一种检测抗氧化活性方法叫"DPPH" 老师他有拿一罐DPPH溶液给我了(只知道他是DPPH+甲醇，浓度我不知道) 我照着期刊比例加入代测物，室温30min後517nm，结果却都不同(三份期刊加入比例都不同) 以下我就用代号简称，麻烦高手帮我解惑 A(DPPH+甲醇) B(虾红素各标准品浓度) 先是 1期刊 A:B = 250μL: 50μL 2期刊 A:B = 300μL: 50μL 3期刊 A:B = 200μL: 50μL 问题一 这三份期刊的比例我都照着做，30分钟後发现517nm照射下，居然吸收度都比原先空白DPPH 溶液还高(个人研判，是不是B浓度太高，A浓度太低，以至於虾红素吃掉了DPPH)，请问为 何? 问题二 如果一切实验方法都正确，是不是"照理说"，高浓度的B越会让DPPH吸收度下降? 问题三 如果是用不同浓度标准品做出来的结果，"通常"图中X与Y轴(浓度与抑制率)会是跟"检量 线"一样有着线性的R值(也就是说浓度越高抑制率越高，并且等比例直线上升)，还是会呈 现"急升後开始缓慢"(随浓度越高，抑制率变成愈来越缓慢上升)直到最後不管浓度提高到 多高，抑制率都平行(达到饱和) 问题四 用此方法好像都是以 IC50为判断点(抑制率超过50%时的浓度是多少)，可是这好像也跟 DPPH的浓度有关是不是? 因为同样IC50时，DPPH如果浓度越高，B却需要越高浓度才可以 达到IC50(问题四如果有任何说错，请纠正我) 问题五 所以一开始我不知道DPPH浓度的缺点就是，有可能B浓度太高(比DPPH浓度高)，导致测517 nm时，因为B都把DPPH吃光光了，测出来的吸收度反而是测到B的，这样说是对的吗? 如果是对的，应该要先测此DPPH溶液的吸收度，然後再以"不超过此DPPH吸收度"加入低於 此吸收度的B浓度，才有可能正确 谢谢大家 ※ 编辑: jj5110 来自: 210.240.249.162 (06/25 20:17)