作者pocession (阿宗)
看板Biotech
标题Re: [讨论] 关於housekeeping gene
时间Tue Jun 14 23:56:52 2011
※ 引述《DJHINN (dj)》之铭言：
: 最近开始着手操作 real-time PCR
: 首先就利用 Actin primer pairs 这个 housekeeping gene 练练手
: 顺便计算其 amplication efficiency
: 但是我发现
: 仅加水的对照组，却也跑出相同的产物
: 於是第二次我就将所有东西都换新的
: 包括 1. real time PCR Mix solution
: 2. 新的稀释过的 primer
: 3. 新分装过的水
: 结果第二次结果...水仍然跑出产物
: 而且我将结果拿去跑电泳，水的对照组可以看到清楚的条带 (同产物)
: 因为我们实验室主要的材料对象是昆虫，也常常会在冰桶上做研磨的动作
: 昆虫有时也会飞出....
: 这样有可能会到处污染吗? 由其是 housekeeping gene 这种超灵敏的 gene
: 不知道是否有前辈有遇过这样的问题?
: 目前: 我重新将血清瓶洗涤过後，灭了新的 二次水
: 等一下会用一般PCR测试看看到底问题是不是出现在水上面...
会 这会到处污染
通常污染源是来自於放大後的产物，检体中的量少，通常一般清洁方法就可以去除，
不太会累积
我觉得重点在跑电泳确认这个步骤，跑完後要确实去污
基本上电泳的器具和区域要和实验完全隔离
且所有接触到产物的器具使用完後要以1% 漂白水泡30分钟再冲洗
另外，最好重订所有药品
然後确认药品乾净再做实验，
重订的药品送来的时候先借别人的冰箱放
确认药品可用，
先找认识的人借个乾净的区域 (就是没有操作类似检体的地方)
在一天的开始 (就是身上还很乾净没有沾到产物的时候)
用PCR REAGENT里面附的水配制，回溶所有药品，
接着空跑几个反应，确认有无产物，没有的话这批药品就可以使用
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.231.72.155
※ 编辑: pocession 来自: 118.231.72.155 (06/14 23:57)
1F：推 DJHINN:谢谢大大详尽的回答....这方面我会再多注意 06/15 18:08
2F：推 elderbear:不知道你们实验室再处理某些含DNA废弃物(用过的plate等) 06/16 09:26
3F：→ elderbear:是用专用的autoclave?还是共用autoclave?? 06/16 09:26
4F：→ elderbear:我也有过类似的经验,後来才发现autoclave处理後DNA 06/16 09:27
5F：→ elderbear:degrade成碎片的大小 通常还是比real-time PCR产物大 06/16 09:28
6F：→ elderbear:所以所用用那台autoclave出来的水或容器都会被污染 06/16 09:28
7F：→ elderbear:这方面是有文献可参阅,不知有无帮助~? 06/16 09:29
8F：推 DJHINN:是共用..autoclave... 不知道可否跟楼上要这篇文献 06/16 14:31
9F：推 elderbear:我看过没留了,已经毕业很久了...印象中主要的paper是考 06/16 15:59
10F：→ elderbear:古相关,化石上残留DNA要用漂白水才能完全做不出来之类的 06/16 16:00
11F：→ elderbear:关於autoclave比较仔细的,是老板帮我从外国学校的论坛找 06/16 16:00
12F：→ elderbear:到相关讨论跟解决办法,用来安慰我不是我的错的(汗) 06/16 16:01
13F：推 DJHINN:老板人真好!! 06/16 16:34
14F：→ ggwha:记得有DNAlookout DNAZap这类赠品.. 06/17 22:33