作者takkyu (心情真好~)
看板Biotech
标题[求救] primary neuron culture contamination
时间Sat May 14 20:36:33 2011
各位好，目前碰到一些细胞污染方面的问题想请教各位。
因为一些原因所以没办法照相，但我会尽量描述希望能得到原因及解答。
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先简单提一下我的步骤：
我是取 P0大鼠的脑 (去除midbrain及cerebellum)的部分，再利用papain lysis
计算完细胞量後，seeding至dish或well中，6hr後更换成 serum-free的medium
(含glumate, glutamin, neurobasal, pen/ster, B27)，并会在第四天加入5um Ara-c。
到第六天则会换成Glutamate free的medium饲养。
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今天发现污染的时候是准备要加Ara-c的第四天 (第三天仍无发现污染的现象)。
刚从incubator拿出来时medium呈现偏橘色(不到黄色)混浊的状态 (有闻到怪味)。
在显微镜下隐约还可见到细胞，但有许多颗粒悬浮的感觉。
约过十分钟後，原本偏橘色的medium回复成原本的混浊红色。
从well下方透过灯光看，轻轻摇有沙沙状的感觉；放置一段时间後有白色的细小颗粒
沉淀在well底部。
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爬文过後 觉得有点像是yeast的污染 (我自己是从沙沙状及发现污染的时间推测，
不确定是否正确，有错请给予指教^ ^)。
想请教各位有可能是哪类型的污染 导致的原因又可能是甚麽？
ps. 有看到的文章说不可以喝养乐多 = =a
谢谢各位了~
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 125.225.134.61
※ 编辑: takkyu 来自: 125.225.134.61 (05/14 20:37)
1F：→ kenshinsandy:显微镜可以看到很多很小一粒粒的小球 应该就是yeast 05/18 00:13
2F：→ kenshinsandy:通常操作时手不乾净比较容易有yeast(个人感觉) 05/18 00:14