作者churchfire (别小看我...)
看板Biotech
标题Re: [求救] 关於BD RACE 的实验primer合成?
时间Tue Oct 5 13:53:03 2010
※ 引述《churchfire (别小看我...)》之铭言：
: 已爬文!
: BD SMART RACE cDNA Amplification Kit
: 内附的primer,可以去自己合吗?因为此kit太贵了!
: 请问板上的各位,有没有自己合成做出来的经验??
: 另外酵素使用其他牌的酵素!!
: 如reverse transcriptase的酵素用I牌,RACE PCR再用其他牌的Taq!!!
: 以上希望有经验的大大,分享一下!!
: 谢谢!!
感谢大家的回覆!!
如果RACE自己合primer并配合他家酵素完成!
我是按照BD clontech的RACE手册合成primer!
我RT的酵素也是使用clontech SMART Scribe RT
但是我打电话去问厂商他说因为这支酵素是RAN dependent DNA polmerase
要作5'RACE的部份,因为5'端要接dG,所以接上去的部份应为RNA template
所以这条primer必须合成RNA primer!!
这样RT的效率才会高!当然後续的PCR也会有好的效率!!
所以
问题1
想请教:这几条primer是仅作一般的DNA primer而已吗?还是有把它做modify!!
问题2
如果知道基因的ATG起始位置後约900bp,但後面就不知道了!
那可不可以用total RNA 反转录合成cDNA後(primer为oligo dT)
设计两条primer(revese为oilgo dA，forward为基因的前端序列)去PCR吗?
(以cDNA为template)
如此就可以得到全长和3'UTR?
请问这样做可以吗?
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 210.69.175.253
1F：→ Ianthegood:clontech是takara的吧... 10/06 00:39
2F：→ Ianthegood:而且用oligo dA跑PCR 3'长度不会很乱吗 会smear吧 10/06 00:40
3F：推 Ianthegood:还有想问一下 manual里面那几个ntd都是XXXXX 你怎麽 10/06 01:00
4F：→ Ianthegood:知道要合甚麽? 10/06 01:00
5F：→ churchfire:BD SMART RACE kit喔!manual第9页,有primer sequence! 10/06 09:51
6F：→ churchfire:是阿!clontech已经和takara合并啦!不过好像因为品牌问 10/06 09:57
7F：→ churchfire:题,我觉得产品还是分开出!网站上说跟T牌会透过C排定购 10/06 09:59
8F：→ churchfire:管理! 10/06 09:59