作者sunday30430 (koalawoman)
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标题[求救] 抽RNA的器具要不要灭菌?
时间Fri Sep 10 19:19:49 2010
我上班两个礼拜以来，一直都在做抽细菌的RNA和PCR，因为我对分生实验室不了解，所以
当初拿到PROTOCOL时，以为是很成熟完整的实验架构，可是我一直都做不出来老板要的，
我去问了很多人才发现，我们的实验架构很有问题，也才知道别人是怎麽做的，其中一点
是抽RNA的tip和eppendorf应该要拿去灭菌，尤其我是再开放式的空间抽RNA和PCR，我跟
老板说，老板说灭菌过後会更脏，因为水蒸气会跑进去盒子里，水有Rnase和DNase，我说
要喷酒精，老板也说没用。
我想请问灭菌真的没有用吗?
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◆ From: 163.25.118.160
1F：→ sunday30430:还有要怎麽说服老板? 09/10 19:20
2F：推 leoblack:灭菌锅用的水是Q水怎麽会有RNase?!你们是加自来水+口水 09/10 19:35
3F：推 datro:这样 直接用DEPC H2O+ filter tip吧! 灭菌去不了RNase 09/10 19:58
4F：→ mzac1b:是用什麽方法抽? 我觉得方法也有差耶 09/10 20:19
5F：→ mzac1b:不灭菌是有些罕见 不会是买已经灭好的吧... 09/10 20:20
6F：→ sunday30430:老板给我一个夹链单上面写DNASE和RNASE free的器具， 09/10 20:44
7F：→ sunday30430:可是要自己装进罐子和TIP盒子里!这样算是灭好的吗??? 09/10 20:45
8F：→ sunday30430:是用geneaid的Total RNA Mini Kit 09/10 20:50
9F：→ sunday30430:我这周末会再做一次，因为之前连酵素在冰上，我都不知 09/10 21:04
10F：→ sunday30430:道，而且菌数也不对，灭菌的问题无法解决，也没有 09/10 21:05
11F：→ sunday30430:FILTER 的 tip,另外，primer的温度也不太对，如果最後 09/10 21:07
12F：→ sunday30430:改了还是做不出来，在跟老板说要不要考虑去灭菌..... 09/10 21:08
13F：推 onlyone0419:买回来的tip跟eppendorf不都是RNAase free的吗? 09/10 21:25
14F：→ onlyone0419:我以前随便抽都可以抽的到，放心吧没有那麽难抽啦~ 09/10 21:26
15F：推 f9361046:RNA很好抽 只要动作快习惯良好就好 09/10 21:33
16F：推 chougham:我们家是器具灭菌後~用180度烘箱烘Overnight再用~~ 09/10 21:37
17F：→ chougham:溶液都会用DEPC处理 09/10 21:38
18F：推 muchmoa:水蒸气会把RNase带进盒子里吗? 09/11 00:55
19F：推 ko363630:RNase不是酵素吗? 那麽高的温度不会死? 09/11 01:25
20F：推 chaunen:当在配制RNaseA溶液时 需经过"煮沸"这个步骤来杀死DNase 09/11 01:57
21F：→ chaunen:这样够耐命了吧XD 09/11 01:58
22F：→ chaunen:pipette拆开用3% H2O2擦过里面, eppendorf tip用镊子补 09/11 02:02
23F：→ chaunen:不需要灭菌 记得eppendorf tip整箱买来时 先拿几包给RNA用 09/11 02:04
24F：→ chaunen:凡是拿取RNA用的东西, 最好使用乾净手套 口罩 09/11 02:04
25F：→ chaunen:所有试剂都要RNase free 酒精 氯彷... 需另买RNA专用的 09/11 02:07
26F：→ chaunen:如果有个抽屉或柜子专门放RNA use的东西最好！ 09/11 02:08
27F：→ chaunen:DEPC是剧毒, 使用请带口罩 手套 1:1000溶於3次水 09/11 02:14
28F：→ chaunen:直接配在乾净的血清瓶中, 在抽风柜中用转子搅拌overnight 09/11 02:16
29F：→ chaunen:隔天灭菌, 杀死DEPC（此时水呈现弱酸性 适合保存RNA） 09/11 02:17
30F：→ chaunen:瓶子跟转子可以用1N盐酸浸泡除去DNA, RNA灭过菌大概就挂了 09/11 02:20
31F：→ chaunen:操作时, 铺抗污纸 手套 口罩必备, 最好别聊天 (切身之痛) 09/11 02:23
32F：→ chaunen:开放空间最好选择没人的角落 09/11 02:26
33F：→ chaunen:其实, 3% H2O2已经蛮威的了, 我刮棒都洗完泡20mins 擦乾 09/11 02:28
34F：→ chaunen:reuse一样好端端的, 抽完的RNA保存在4度, 一周以内都还好 09/11 02:30
35F：→ chaunen:跑agarose gel还是好端端的2条band 09/11 02:31
36F：→ chaunen:抽细菌的话应该不能灭菌, 因为细菌的genome会炸出来的 09/11 02:32
37F：→ chaunen:细菌没有intron 没办法跨, 可能更需要注重genomic DNA污染 09/11 02:34
38F：→ chaunen:抱歉 我还没看完就推文... 没看到你做的是细菌.... 09/11 02:35
39F：推 bider:刚买来的TIP的确不用灭菌 我们实验室只有跟细胞培养有关的 09/11 05:26
40F：推 bider:才会进行灭菌 09/11 05:30
41F：推 bider:不如请s大把实验流程跟大家说明一下吧 一起讨论 09/11 05:36
42F：→ sunday30430:看到大家的意见真是太感人了，因为我是应届毕业生，以 09/11 08:25
43F：→ sunday30430:前实验室也不是做分生实验，所以我在做的时候有好多个 09/11 08:26
44F：→ sunday30430:疑问，但因为老板也不清楚，因为他也不是做这个，所以 09/11 08:27
45F：→ sunday30430:我也真的很无奈，我会先改些条件，周末结果会出来如果 09/11 08:28
46F：→ sunday30430:还是不行再来打整个流程，太谢谢大家了! 09/11 08:29
47F：推 allture:我们家抽RNA的eppendroff也没灭菌 因为来的时候就是无菌状 09/11 10:20
48F：→ allture:态 只要注意一下实验周围清洁 应该不需要太烦恼 09/11 10:21
49F：推 owl628:实验室抽RNA的eppendroff跟tip也都是直接用没有灭菌 09/11 17:31
50F：推 huhu126:不灭菌是可以的,但是要带乾净手套,以及不要边抽边交谈, 09/12 00:11
51F：→ huhu126:geneaid的kit应该不会有问题,但buffer若要加酒精,请加100% 09/12 00:12
52F：→ huhu126:无水酒精而非工业用酒精,另外应该就是菌数要对且健康.... 09/12 00:14
53F：推 icome:RNase高温会denature 但回到室温又会renature 所以罗... 09/12 01:10
54F：→ sunday30430:居然要加无水酒精，老板好像不是加这个耶! 09/12 11:18
55F：→ Lowrider:插ｔｉｐ跟装小离心管的时候要店店 然後灭菌 酱就ｏｋ 09/12 16:15
56F：→ Lowrider:带手套插 喷点酒精 09/12 16:15
57F：→ chaunen:无水酒精室温下很快就变95%的罗~ 09/12 16:53
58F：→ sunday30430:所以加一般95%酒精有关系吗? 09/12 19:02
59F：→ chaunen:我都用95%下去算... 抽DNA RNA OK 09/13 02:12
60F：→ chaunen:题外话, 抽nimi的 kit用工业酒精也没啥问题= =" 09/13 02:13
61F：→ chaunen:(无水酒精好贵...ORZ) 09/13 02:13
62F：推 jimmyshen17:我们RNA USE的tip和eppendorf都会开新到的货 09/14 13:34
63F：→ jimmyshen17:也就是封口袋只会打开一次 tip用镊子插... 09/14 13:35
64F：→ jimmyshen17:其它物品只要有关抽RNA都是独立一套 09/14 13:35
65F：→ jimmyshen17:当然灭菌会进行 只是注意从打开袋子的同时 09/14 13:36
66F：→ jimmyshen17:全程戴手套 戴口罩 09/14 13:37
67F：→ jimmyshen17:最後抽不抽的到就是运气了.... 09/14 13:37
68F：→ jimmyshen17:在说你的RNA稳不稳定 那也是另一个问题y 09/14 13:38
69F：→ jimmyshen17:有人不戴口罩 边讲话边抽 RNA也抽的到= = (无奈) 09/14 13:39
70F：推 lulusa:我以前做了两年随意抽白血球RNA的实验 其实真的没那麽难 09/15 20:16
71F：→ lulusa:只有TIP用filter的 其他的都没有很特别准备酒精是100%+DEPC 09/15 20:17
72F：→ lulusa:每次抽出来的量都很稳定满多的 就算以乾的RNA保存两年 09/15 20:18
73F：→ lulusa:测出来的mRNA量也没有少太多不过tip不要灭过我老板也这样说 09/15 20:19
74F：推 refulgence:之前跑RNA是把pipet拿去灭菌...还蛮有效的 09/20 17:58
75F：推 reinherd:我们实验室用unfilter tip/买RNase free H2O来抽RNA 09/22 03:34
76F：→ Ice9:你 18S/28S rRNA 的品质呢？如果没有 smear，那就不用担心。 10/03 18:23