刚开始学养细胞时 进阶举办了一场有关细胞培养的演讲 讲师是食研所的负责人 他说 食研所负责这麽多种的细胞培养 他们继代时从不离心 因为离心伤细胞 那这样子要怎麽passage呢? 我发展了一套超节省超环保的继代细胞法 过程中只需要用2支无菌dropper 完全不需用到塑胶pipette 但前提是 须将细胞养在10cm dish中 以我的MRC-5 cell为例 1. 一开始解冻细胞时须以37℃快速解冻後，就直接将细胞加入10cm dish中， medium约10mL，不需离心，隔天等细胞贴上後换medium就好 换medium时直接把上盖打开把medium倒到废液桶就好，再用dropper吸约7mL medium到dish中。 大部分的细胞 (像我的MRC-5) 是不太会受低浓度的DMSO影响的，只有少部分细胞 很敏感才需要以离心把DMSO去掉，例如 MDCK cell。而直接把上盖打开把medium 倒到这种豪气的作法是要勇气的，要一气呵成 (其实就跟配meduim一样，大家不 都是把DMEM跟MEM直接倒出来到flask中) 本人从没有污染过，同事看我这样也很 傻眼没人跟进，但是这样就直接省下了1支塑胶pipette，吸medium时我都是用 dropper，只是要吸很多次而已，除非是在分细胞到很多well中才会用到比较方便 的pipette。成本来说无菌dropper约3元/支，5mL pipette约4.2元/支， 10mL pipette约4.5元/支。 2. 继代细胞时，一开始也是直接把medium倒掉後，用dropper1吸约2.5~3mL PBS 轻轻滴到细胞上 (此时把dropper1要留着倒放在架子上，不要碰到别的东西就好， 通常我们都用50mL离心管所附的保丽龙)，以PBS wash细胞後直接倒掉，再用 dropper1吸1mL T/E到dish (因为T/E本来就是溶在PBS中，所以不冲突) ， dropper1一样要留着，接下来就是放到37℃作用。这一步是关键步骤，每个细胞 作用时间不一样，开始时要test作用时间，要找到细胞要掉不掉的时间，像我 MRC-5作用4min会全掉下来，但作用2.5min时不拍它，它还是暂时不会飘起来， 为什麽要这样子？因为作用到2.5min时就用dropper1把T/E吸掉 (dropper1要 继续留着)，此时细胞还在disk上。用dropper2吸约2mL medium到dish中 (dropper2要留着)，再用dropper1 pipetting细胞看要分几分几，再用dropper2 补足medium。 整个过程只需用到2支dropper，省下了离心管和无数支pipette，我相信大部分的人 每一个步骤都用掉一支pipette，整个过程下来4~5支pipette外加一支离心管跑不掉， 因为很过程麻烦，大家又怕污染，所以不好推动，给大家参考罗！ --

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