作者iwenyo2 (柚子)
看板Biotech
标题[求救] competent cell
时间Sat Jan 23 00:13:17 2010
最近老师需要10的8~9次方的competent cell
但我怎麽做最好都只能到5*10的6次方
想请问 板友
大家养菌的方式跟OD值
看版 及书 大部份都养2小时就可以到0.5~0.6
但我养2.5小时却只能到0.3~0.4
还有假如养 100ml 用250ml 养是不是会导致氧气不足
我是用PSI broth (参考国外的protocol) 看网路上大家好像都用SOB
老师说用 PSI borth就可以在培养过程中 细菌细胞膜会变薄弱
另外 测效率的plasmid DNA 是否不能适用於不同的competent cell
因为我门实验室用的competent cell有DH5a, ccdB, stbl3, HB101,JM109
但怎麽都做不好
拜托 高手教授我几招
非常感谢!!!!!!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 61.230.79.188
1F：推 cutilis:我们的protocol是有在subculture时加MgSO4 01/23 00:25
2F：推 FUSION87:你罐子太小了 我们都养锥形瓶的1/5~1/4体积 01/23 00:56
3F：→ FUSION87:ex.5L瓶养1.25L或1L 01/23 00:56
4F：→ FUSION87:另外competent cell制作时的技巧会影响效率很大 01/23 00:58
5F：→ FUSION87:基本上制作competent cell时，菌会很脆弱，所以不能太剧 01/23 00:59
6F：→ FUSION87:烈，然後动作要快，要确实在冰上处理 01/23 01:00
7F：→ naturer:用电的 01/23 11:09
8F：推 hdf87ery:照openwetware上的TOP10方法做,没冰近8次,有冰7次方出头 01/23 22:23
9F：推 silverberry:用电的可以到 10^10 效果好~~ 01/24 16:36
10F：→ silverberry:如果真的要求这麽高 用买的会不会比较省事又有保障啊? 01/24 16:37
11F：推 bluecsky:如果真要这麽高效率 我建议用买的= = 其实没有很贵 01/24 18:08
12F：→ bluecsky:10^8 10^9已经是满高等的 要制作要很小心 01/24 18:08
13F：→ bluecsky:除了含氧量以外 你养的转速也要调整 让他长好一点 01/24 18:09
14F：推 icome:0.3-0.4就可以做了 不一定要到0.5 01/25 00:14
15F：推 snowypuppy:我们家也是摇到OD值0.35就做罗～怕0.5的菌已经太老了 01/25 11:23