作者piny72 (小猴)
看板Biotech
标题[求救] 利用tissue做comet assay
时间Mon Nov 16 17:01:45 2009
最近要进行comet assay彗星试验
遇到困难...
因为以前在学校我都是用血液当sample
取白血球(cell)做comet
现在在公司,主管想要我利用tissue做这个实验
(我拥有rat/mouse organ)
虽然comet assay的protocol上有注明
如何用tissue做这个实验
但是我试的结果则是发现:
做tissue的前处理後,要拿sample去计数细胞
结果在显微镜下只有非常少量的cell(而且还是死的)
想问问有利用tissue做过comet assay的高手
可以帮我看看是哪个步骤有问题吗?
谢谢^^
Tissue Preparation
1. Place a small piece of tissue into 1–2 ml of ice cold 1X PBS
(Ca++ and Mg++ free),20 mM EDTA.
这里我剪了小鼠的肺一小块在培养皿中,浸泡以PBS稀释的20mM EDTA(体积1mL)里
然後将这小块tissue稍微剪一剪
2. Using small dissecting scissors, mince the tissue into very small
pieces and let stand for 5 minutes.
接下来就静置5分钟
3. Recover the cell suspension, avoiding transfer of debris. Count cells,
pellet by centrifugation, and resuspend at 1 x 105 cells/ml
in ice cold 1X PBS (Ca++ and Mg++ free).
之後取留在培养皿中的sample(就是步骤一浸泡lung tissue的solution)
0.01mL拿去计数细胞
结果却发现... 细胞数量非常少(死细胞),不然就是非细胞样子的碎片
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