※ 引述《katty7389 (吹跑了~)》之铭言：: 大家好我是做western blotting的新手 : 9.将取得的sample做定量 : １０。定量的结果假设为２.４１μg/μl,我每个well想loading 40μg.就加 : １６。５μl的sample与４μl　６x的sample buffer混匀(无论多少sample : 　　 : 　　　都加４μl的sample buffer)　 : 11.100度煮protein 10分钟 : １２。loading sample : 有错麻烦大家指正　谢谢 10.以你的方式每sample 应该要补水到20μl再加4μl sample buffer 才符合所谓的6倍 Sample Buffer有一个作用主要是让蛋白溶在Glycerol loading Sample时才能有效沉淀到Well内 你原本的配法会造成蛋白浓度高的沉淀较多浓度少的就沉淀较少 多的蛋白就会往上漂 补水与不补水我都用过 所有Sample补水到同体积会使跑出来的Band都一样长比较好看 不补水的比较适合loading较大量蛋白 每个Sample buffer加的数量是 定量後/5 (你原本的就是16.5/5=3.3) 因沉淀快band会较细较亮 但当每个Sample量差很多时Band就会有长有短 比较不好看 还有就是配Sample时Sample buffer要先摇的非常均匀再加 每片loading时速度要快 减少Sample扩散的时间 赶快Runnig让Sample赶快跑进上层胶 减少一些人为的误差 --

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