作者JoyHuang (不想改...)
看板Biotech
标题[求救] Raw细胞分化成 OC
时间Thu Oct 29 17:09:33 2009
最近实验要开始做将 RAW 264.7 分化成 osteoclast 细胞的实验。
根据paper所叙述，加入 RANKL 50 ng/mL 处理五天後，
染 TRAP 若看到三核即为 osteoclast
第一次实验细胞数量没抓对，五天处理下来，细胞数量爆高。
相互堆叠，造成辨认的困难。
第二次实验将细胞数减至1/4 ，五天处理下来，细胞大约只占了整个well的不到五成。
而且并没有观察到有比较大的细胞产生（因为osteoclast是三核，应该会比较大颗）
对於positive control竟然没有分化现象出现，想上来求救一下。
看板上是否有其他人实验室曾做这种实验，希望可以求教！
另外，染TRAP部分。因为我们把细胞种在 24 well中处理，
TRAP染色也是直接把染剂丢进去。
却发现这样无法使用高倍的倒立式显微镜观察。
请问其他人是怎样处理种在well中的细胞呢？
应该去找正立高倍的显微镜？或是有其他方法可以处理？
谢谢
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1F：→ misssquid: 同样困扰了很久，留个纪录。medium换成alpha-MEM 10/10 22:35