作者snkre (123)
看板Biotech
标题[求救] siRNA knockdown後的functional assay
时间Fri Jul 10 22:03:14 2009
siRNA 是买Dharmacon的smart pool
大约在48hr target gene 的 mRNA 约可 knockdown 50%
若要做functional assay
ex:cell proliferation(MTT)....等等
时间点势必要再拉长,但cell line会不断的proliferation
但 随着cell的proliferation 有被knockdown的比例就变少了
不知各位是如何去assay siRNA knockdown之後的function
(主要是与cell proliferation相关,如MTT,colony..等,
而先前用加药的实验发现某些基因会down regulation)
还是用lentivirus的knockdown系统比较好
谢谢!!
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※ 编辑: snkre 来自: 140.112.130.37 (07/10 22:03)
※ 编辑: snkre 来自: 140.112.130.37 (07/10 22:08)
1F：→ acs1:之前进行基因knowndown的分析都是选殖出stable knowndown细胞 07/10 22:25
2F：→ acs1:transient的方式比较没办法assay唷 07/10 22:25
3F：推 vancent:TRANSIENT时间点抓好照做啊~只是STABLE是最理想的而已 07/10 23:59
4F：→ vancent:PAPER也很多都是TRANSIENT做的~没什麽不可以 07/11 00:00
5F：→ snkre:可以每隔2-3天用追加siRNA的方式吗?paper中是没有特别提到 07/11 22:13
6F：→ rimeni:追加可.要记得做realtime PCR确定knockdown efficiency. 07/12 00:26