※ 引述《malakaki (神奇小马)》之铭言： : 请问一下, 你的二抗比例, 牌子 : ECL 哪家的? P牌还是M牌? : 只有这抗体会这样, 还是每种抗体都这样? : CS牌的 caspase 3 不错用, 是个几乎没有杂讯的好物 : 家里只有这支是买CS的吗? : 其他有哪些牌子呢? : ※ 引述《linwei (我会好好加油^^)》之铭言： : : 请益各位 : : 因为我第一次遇到这种情况@@ : : 我压的protein 是 cleaved caspase 3 : : 使用的抗体是 cell signaling 编号9661 的抗体 : : 今天我做实验 : : 压出来一整片都是黑的 : : 结果关灯发现整片menbrane都发亮 : : 我很确定我二抗没有给错啦@@ 且也有很努力的wash乾净 : : 因为抗体是跟别人要的 : : 且我同学他也没有做过这个protein @@ : : 有人跟我说 如果是 Polyclonal antibodies 的 : : 他的专一性也会比较差 : : 会是这个原因吗? : : 该怎麽改善呢? : : 希望有做过的版友可以提供我一点意见 : : 好让我下次再试的时候知道该怎麽改进@@ 小弟的个人经验是 这种情况 通常是"抗体"本身的问题 然後 如果要换的话 他们会要你填一个complain form 内容不外乎 1.换成BSA blocking 2.增加TBS的Tween-20 的量(譬如从0.1%改成0.5%) 3.稀释一抗及二抗的浓度 4.增加wash的时间 及次数 5.换成比较不敏感的ECL 但是 依照往常的经验 作完这些ｔｒｏｕｂｌｅ　ｓｈｏｏｔｉｎｇ之後 　　会 feel more troubled 因为 都没有用 当你把trouble shooting的slide给他後 他们只好赔给你一只不同Lot 或是不同epitope的抗体 以上 是 换了好多只抗体的感想 祝你可以借到另一只好的Caspase3 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^(根本的解决之道) : : 感恩感谢～！！！！！ --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 123.192.22.34 ※ 编辑: Mrbrowncafe 来自: 123.192.22.34 (07/01 18:31)