作者takumatw (那粒台风)
看板Biotech
标题[方法] 我想请问一些有关於ELISA (TNF-ALPHA)_的基本问题!!!!!!!
时间Sat Jun 13 22:12:48 2009
我是第一次做ELISA 附近没人做对这实验的样貌不清楚,kit是之前实验室的人留下的,
行踪不明
所以我想问一些很基本的问题
我使用的是HUMAN TNF-a ELISA kit (pierce)
细胞是U937 悬浮型 加药treatment後测 TNF-a
1.TNF-a 是应该要存在於细胞上清液中吗??如果是,我应该用什麽离心条件取得上清液
300xg 5min ???
2.每一种sample要做2重覆,这2重覆应该是指同时准备2盘同样的细胞加同样浓度的药
分别取1次上清液共(2个sample)??这样说对吗???还是同一细胞上清液取2次就好?
3.根据说明书,应该是它附的96well plate上有coat 某种东西抓得住sample的TNF a
再以biotinlated antibody抓TNF a 再以Streptavidin-HRP Reagent抓biotin最後以
TMB呈色
我这样对这原理的理解有误吗???
4.大家在wash well之後,是怎麽把washing buffer 抽出来,直接倒掉再甩一甩吗??
5.我怎麽知道实验准不准确或成功???
6.如果plate用完了,但是buffer还有,plate通常有得卖吗???因为我不熟悉这实验
暂不考虑自己coating
谢谢大家,还请有做过的回我一下!!!!
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