※ 引述《daniel2806 (Tomorrow is another day)》之铭言： : ※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言： : : 你有作 positive control吗？ : : 染个 cytoskeleton 之类一定会有的东西先 : 一般萤光的讯号很弱, 所以我建议用二抗接biotin : 中间再用avidin-biotin将讯号放大, 最後先用DAB这种可见光的substrate来染, : 若有染上马上就能看见 : 另外, fix後的组织都会用citrate buffer, 100度煮个10~20分钟, 让抗原恢复 : 小小经验 : 祝成功!!! 首先...lymph node或者spleen染不到的话就该考虑抗体的适用性了.. 请先查查看paper里大家用来染这些marker的antibody clone是什麽... 有些monoclonal antibody真的染不好甚至染不到.. 再来就是二抗是不是有可能坏了...萤光conjugate的抗体有时後比较容易坏掉... 总之...spleen或者lymph node一定是要染出来的...虽然不同种tissue的染色条件不一样.. 但是那是个确定一抗没有问题的方式...确定抗体可以用之後, 再去做在skin tissue上.. 此外, 也稍微回应一下daniel2808的建议...biotin是好方法, 但是那个antigen retrieval (citrate buffer heating)在冷冻切片时是不需要做的... 以上~ --

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