作者runpapa0520 (PAPA)
看板Biotech
标题[求救] kupffer cell trypsin-EDTA 浓度要多少才会下来?
时间Sat Mar 21 09:51:41 2009
请问利用贴盘方式洗去非kupffer cell，
culture 24hr 之後，
用D-PBS WASH
加入trypsin(?%) 作用?分钟
加入含血清medium中合，
收集细胞做实验。
我试过0.05% 1min--------------不动如山
我试过0.05% 2min--------------2-3成
我试过0.5% 1min--------------大约一半
我试过0.5% 2min--------------7成
请问有人有经验吗? 因为细包很少，没有办法一直试，
请有经验的前辈告诉我，少走一些冤枉路，谢谢!!
ps我之前看文章有用到0.5%的1min，但周遭人都跟我说太脓，细胞会死，
我去染色看存活率是还可以，但不知会不会有其它影响。
我用corning 的dish。
不考虑用刮的，我需要完整的细胞。
谢谢各位的回答!
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 118.167.7.85
1F：推 lssunti:0.05％ 作用的温度？ 37 or RT? 03/21 12:11
2F：→ runpapa0520:皆是37度，放回培养箱中等。 03/21 18:55
3F：推 humwang:有加EDTA吗? 03/21 21:13
4F：→ runpapa0520:我买的是trypsin-EDTA 已经有含了 03/22 10:19
5F：推 onlyone0419:会死吧用TRPSIN，改用6.85mM EDTA only,15min 试试看 04/08 01:50
6F：→ onlyone0419:我自己是用来打腹水巨噬细胞，供参考~ 04/08 01:51