作者aborwang (Abor)
看板Biotech
标题Re: [求救]EMSA基础问题
时间Thu Mar 19 01:53:38 2009
※ 引述《reteporeh (被实验中)》之铭言：
: 1. 去做protein-DNA interaction 的DNA probe的序列长度有限制吗？或者有最佳长度?
: 2. 我看protocol 有加poly dI dC 也有加cold unlabel probe 想请问这两个都是
1.我做过DNA probe约200bp的，一般而言是20~200皆可
但如果你probe片段长，用的protein又是cell lysate
那可能需要用agarose gel才看的到，因孔径较大，
不过一般都是polyacrylamide gel
2.网路上有许多免费的protocol，例如Thermo公司的。或者Current Protocol
Unit 12.2，而古老的Molecular Cloning有些基本观念可以看看
3.做EMSA，经验跟condition很重要，例如probe与protein的比例、
dI dC与BSA的量、加或不加，probe的制作、binding buffer的条件等，
最好还是找到可以问的Lab学一下比较快
话说我也还在奋斗中...Orz...
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.97
1F：推 reteporeh:我也想.> < ..可惜找不到可以问的..网路看到protocol版 03/19 13:10
2F：→ reteporeh:本挺多的..大致流程都差不多..但都会有一点点出入.. 03/19 13:11
3F：→ reteporeh:真的要实作後..才知道什麽才适合自己的东西 03/19 13:12