作者lindalin173 ( Toronto)
看板Biotech
标题Re: [求救] 蛋白质纯化-产物退冰会沉淀
时间Wed Dec 31 21:09:49 2008
※ 引述《turtle24 (乡民龟)》之铭言：
: 使用Ni2+ column纯化了数批蛋白质 表现系统是BL21以及BLR
: elute->浓缩->通G25或透析换成PBS buffer->再浓缩->产物
: 产物冰存-70之後再退冰会大量雪花般片状沉淀 且难以回溶
: 操作同系统的约有四五人 每个人做的都会发生退冰沉淀的情形
: resin中间有换过一次牌子 两个牌子的纯化产物都有退冰沉淀情形
: 请问有没有方法可以避免上述的沉淀
: 之後产物还需要二次纯化以及通S200分离杂band 所以尽量以不影响後续处理优先
: 初步的想法是从存放的buffer-PBS下手 提高盐类浓度或是添加一些物质
: 感谢解答及提供任何意见
如果还要作第二次纯化
是否第一次纯化後就不要浓缩（有的蛋白质浓缩後容易不稳定）
不要冰存
直接通第二次管
浓缩时只要看到沈淀发生就停止
若你的protein是enzyme,
加些substrates可能可以稳定你的protein
每个protein的性质不同（我还遇过protein不喜欢低温，要在常温下纯化）
找些文献看前人有无任何tricks
Good luck!
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◆ From: 99.231.118.215
1F：推 unrealfox:蛋白纯化真的是条辛苦的不归路阿 大家一起加油T_T 12/31 22:51
2F：推 jellies:加甘油..沉甸表示你的蛋白变性...要加抗冻剂...冰在-70 01/05 20:55