作者bolly (bolly)
看板Biotech
标题[求救] competent cell制作
时间Tue Sep 30 13:35:37 2008
我们实验室之前都是直接买kit作transform
但是我觉得有点浪费 所以想试着自己作作看
我用一瓶看起来有点年代的氯化钙配制成0.1M溶液(已灭菌)
将0.5ml over-night菌液加入50ml LB养到OD 0.4
3200g离心去除上清液 加入20ml氯化钙使悬浮
置冰上40min 离心10min 去除上清液
最後加1ml氯化钙重新悬浮 分装0.2ml一管
制作的菌种是DH5aphla 和BL21(DE3)
直接作transform 但是都长不出来
我想请问制作过程还需要注意什麽小细节
因为我是自己摸索 已经作过好几次都不成功
之前有请别间实验室的学姐教过 有作出来
但是使用的药品是他们实验室配的
回来自己作的几次都失败 很灰心= =
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.120.202.50
1F：推 elite2:3200g，感觉有点快，我们都只是1000g而已，参考看看吧 09/30 13:40
2F：→ bolly:1000g是离心多久呢 09/30 14:11
3F：→ davideason:做这个超搞刚~连细菌生长状况都要监控~用买的拉 09/30 14:50
4F：推 enisx:贴上 #14wnDD_4 参考本版我po的那篇, 之前我常作!! 09/30 15:10
5F：推 tsubasawolfy:OD0.6已经快要过log期了吧- - 09/30 15:12
6F：→ tsubasawolfy:我们是0.375 通常0.32-0.35就会拿起来用了 09/30 15:12
7F：→ tsubasawolfy:还有CaCl2也要加一些东西 09/30 15:13
8F：推 konlon:做完放在四度冰箱 12-24小时使用 可增加效率 09/30 16:36
9F：→ bolly:上面我有打错 应该是OD 0.4 抱歉 09/30 16:38
※ 编辑: bolly 来自: 140.120.202.50 (09/30 16:39)
10F：→ bolly:所谓的氯化钙要再加一些东西是哪些东西? 09/30 16:40
11F：推 thshf:CaCl2我会wash两次，最後一次resuspend会多加glycerol抗冻 09/30 17:23
12F：推 cryosakura:小弟若没全程在cold room做，也会全程在冰上 09/30 18:00
13F：→ cryosakura:不用pipette up and down来resuspend,要温柔... 09/30 18:04
14F：→ cryosakura:CaCl2重配一罐,再试一次吧! 09/30 18:05
15F：→ alaric:2500xg, 2400xg 09/30 20:29
16F：→ bolly:氯化钙我再向别间借一些来试试看吧 10/01 00:56
17F：推 jabari:原po可以去参考Q牌QIAexpressionist系列里面的作法 效果好 10/01 00:57