※ 引述《calmato (Anita~)》之铭言： : ※ 引述《albertwang (会思考的鱼)》之铭言： : 不好意思~因为我是第一次接触分生~很多东西都是自己try : 或找资料或问人~所以有很多东西~不知该怎麽问或该注意什麽 : ~所以真的很不好意思~遇到很多问题却自己一直没法解决 >"< : 厂商给的information 是只有说 To make 100uM stock solution : add 255 ul of buffer : 我的working primer是从这里面取10ul primer + 90 ul water : 那我把我的所有try的条件po上来~但不知道这样是不是您说的反应条件? : 跑PCR ，total volume 30，water 19.85，primer Forward and reverse : 各1，10x dNTP 3，10xPCR buffer 3 ，Taq 0.15 ，Template DNA 2 : 以上单位都是ul。但我的DNA浓度品质不一~OD从 40~800 ng/ul : 使用restrition enzyme: PCR products 5，water 16.4，10x Buffer 2 : 50X SAM 0.6，enzyme 1；total volume 25，使用的厂牌是Fermentas : 它的protocal是PCR reaction mixture 10ul(~0.1-0.5ug of DNA) : water 18 ，10X Buffer Tango 2，50XSAM 0.6，enzyme 1-2 : 因为考量到我的PCR products加10会切不完整，~所以才加5，但照我的想法 : 我的DNA量不算太少，切出来应该会很清楚，但不知为何拍出来照片都很淡 : 我一直找不出原因。 : 也想请问您刚说用酒精沉淀，是如何做呢? : 以上很冗长，感谢您的指教!! PCR完的product要clean up後测OD才准吧...不然你也只会测到一堆primer 如果直接拿去切...你所说的100bp以下也有可能是primer dimer 所以就是要先把primer 先去除後再考虑你说的问题 所以呢 应该有两个方法 1.用PCR purification kit 去除primer buffer Tagpolymerase 因为会有loss 所以做PCR的时候可以多做几管(clean up顺便浓缩) 2.直接跑电泳 然後把你要的band切下来做Gel degestion分离出你要的片段 这方法会比第一个loss更多(取决於你切的胶量, kit品质) 只是可以更直接确定你纯化出来的是你要的产物 之後的产物再拿去做你的PCR check应该会更有准确性 --

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