作者tsubasawolfy (悠久の翼)
看板Biotech
标题Re: [求救] IPTG诱导E.coli产生绿萤光
时间Sat Jul 26 11:46:16 2008
※ 引述《onlyone0419 (期待)》之铭言：
: 由於这株菌是别的实验室给的(要拿来做phagocytosis)
: 目前联略不到给我这株菌的学长@@
: 只知道当初说要加 1mM 的 IPTG 来诱导
: 请问有大大知道
: 是要养菌的时候就直接加下去吗?
: 还有是要诱导多久 = =
: 怕养太久会产生太多protein
: 感激<(__ __)>
: ps:老师说养太久会产生太多蛋白或是菌会太老...
: 可是我只养10小时啊@.@...会太久吗? 我看很多人都是养10小时以上
: 0rz
最普通的方法...
1.先用养菌管养你的菌养充足 (这看各个实验室传承的时间 科科)
2.抽取适当的菌液量到你准备induction的培养瓶中 加之前取1mL当测OD的blank
(抽多少量...一样看你们实验室前人经验 没有的话去找vetor制作商
应该都有online protocol)
之後每隔一段时间测OD600
OD值大概0.4-0.6就会加入IPTG(这也是看各实验室或看vector)
ps 1.2步骤都要加antibiotic
3.加入IPTG
4.加入後每隔一小时取1mL 起来离心收pellet (收完记得插冰上..)
5.通常大概4-6小时(看vector能力..) protein就应该已经最大量
6.把步骤三的那些pellet拿去跑SDS-PAGE 然後染胶
(最便宜的Commasive blue应该就好了 要用silver or sybro你高兴就好ˋ(′_‵||)ˊ)
看你的protein在第几个时间点就达到最大量 之後就用那个时间点就好
pellet怎麽跑的话....1XSDS sample buffer加下去搅一搅煮一煮就可以load well
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SPHRYU ASUKA LANGLEY ◣ thePainter
Wenn "Liebe" heißt,dieses Versprechen bis zum Tode ▎◥ ◥ ◣
nicht zu brechen...dann verspreche ich: ◣ ▍ ▁▃▄▅▄▃◥
dich immer zu lieben,und keinen Mann außer dir, ◥◥ ▌ ▇
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sogar jedes Haar auf meinem Kopf gehört dir. ◥ ‵▆▆▇
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◆ From: 163.15.174.201
1F：推 onlyone0419:感激<(__ __)> 07/26 12:02
2F：推 nightcatman:这篇很实用 07/26 17:58
3F：推 stanley300:好文~推 07/27 23:58
4F：推 hurdle:步骤六应该要用Western blot去监定 07/29 12:10
5F：→ hurdle:不然整个没纯化过的bacteria lysate, protein会一大堆 07/29 12:11
6F：→ tsubasawolfy:p是会一堆band 但是只要知道自己蛋白的位置并观察 07/29 18:16
7F：→ tsubasawolfy:粗细变化就知道是哪一个 07/29 18:16