: ※ 引述《tincta (薰？那我的碇真嗣呢？)》之铭言： : : 事情是这样的。 : : 在下前一阵子将培养的细胞株， : : 以皮下注射的方式， : : 注射到裸鼠的皮下前後腿脚窝处（腹侧面）。 : : 在注射完一周时， : : 基本上鼠只（N＝6）都还存活， : : 但我有发现鼠只的眼睛以及脚指有不正常的肿大。 ^^^^^^^^^^ ^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 很明显细胞转移, 并非打在皮下(可以已经是在肌肉层) : : 然後也不是很爱动。 : : 但是再过一周，就只有2只为活体。 : : 老鼠肢体末端也呈现黑色坏死。 这里考虑你的实验目的为何?? 如果是为了长出tumor, 但是却有其他不应该的现象 可以考虑 1. 细胞数太多 2. 是否在注射细胞时, 已不小心刺穿腹膜, 已经属於ip注射 : : 因为行政上的缘故， : : 所以我是在A实验室培养细胞， : : 回溶於PBS（高温灭菌但无过filter）中， : : 在骑车到实验室B的动物房注射。 : : 我在想我的裸鼠会大去， : : 是不是因为细胞株在运送过程中污染？ : : 还是说因为我是第一次注射活体， : : 在没有人指导前处理的情形下， : : 在操作上产生污染？ : : （因为我有使用pipette，我後来有听说， : : 事实上pipette是最容易污染的， : : 宁可使用塑胶用过即丢的auto-pipette比较保险。） : : 我後来也回想说，是不是我自己灭的PBS会有问题。 : : （那也是我自己配的，用实验室一般用药配置） : : 我在想应该势必要重新再来， : : 所以不晓得有没有先进可以提醒我一下，哪些步骤应该要非常小心， : : 才不会又使裸鼠死亡？ : : 另我想下次直接去药局买医疗用的生理食盐水来打散细胞， : : 以防止自己因为自己灭的PBS出问题而使裸鼠感染。 : : 在此我想我要简述一下我的实验步骤： : : 将细胞株由培养的T25上以trp打下来，离心後再打散於medium中， : : 之後进行细胞计数，并取适量细胞液离心，取得十的七次方细胞数/每管。 : : 此时去除上层medium，加入高温灭菌过的PBS打散细胞，使细胞悬浮。 : : 将装在eppendroff中以预备好的细胞悬浮注射液在flow中，置入夹链袋中， : : 放在口袋中保持体温，（骑车）至动物房。 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^ 一般都是建议放置於冰上, 以减少细胞的代谢. : : 以医疗用注射筒，皮下注射於裸鼠前後腿窝侧腹处。 ^^^^^^^^^^^^^^^^ 不同大小的针头也会影响xenogen的结果, 一般可用24~26G : : 我目前想出的改进点是，不再使用pipette， : : 而使用用过即丢塑胶制auto-pipette， : : 以及在打散的步骤中， : : 使用医疗用针筒打散细胞株， : : 并且我想用药局卖的医疗用生理食盐水取代原本自己灭的PBS ^^^^^^^^^^^^^^^^ 我想应该没有差别, 说不定更脏.... : : （但不知此点是否可行？） : : 所以还请各位版友多方指正， : : 真的很需要各位的帮忙。 最後建议你 可以依照你的细胞株的名子, 去找找paper, 大家一般施打的细胞数 搭配实验目的, 和设计的实验时间, 细胞数量多→tumor长的快, 反之亦然. 加油!!! : : By seminar接近爆炸的硕一升硕二但却是实验室最大的忐忑研究生 --

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