你的磷酸化位置是哪里？ T308本来就不好做loading的量几乎都一定要大於100ug S473我都是loading 50-70ug 这样才可以每次都有讯号 当然不同细胞表现量不同 你可以多试试! ※ 引述《crement (cometoseeme)》之铭言： : 试试看Pierce的ECL NANO or Pico : 不同细胞本来就不能比阿，表现量很可能不同， : 多一点protein，换high sensitive ECL， : 压片久一点， : 然後去买好一点的X FILE， : 加油吧！ : ※ 引述《lorna184 (小宛)》之铭言： : : 希望版上的大大可以提供一下宝贵的意见 > < : : 小妹原本用cell signal的p-Akt,但是压出来片子超乾净的说 : : 後来再try几次,它终於有一点点出现(真的只是一点点),还压了一个多小时 : : 以为抗体有问题,所以就try它们的positive control是有成功的 : : 所以想说会不会因为所有的东西都是for它们的,所以买了abcam的抗体来try : : 结果........是一样的,所以抗体方面是没问题的,但一点疑惑就是, : : 两种抗体都是for human 和 mouse,我们用相同的条件做老鼠和人类 : : 老鼠的band超明显,但是人类就不行了,接着就开始寻找问题, : : 想说会不会是milk或是BSA的浓度太高,以至於把membrane的空缺都给补满了, : : 所以抗体才抓不上去,原本用 5%安佳blocking 1hr,一抗(1:1000)in 5%BSA 4℃ overnight : : ,二抗(1:1000)in 5%安佳 RT 1hr : : 後来尝试 3%安佳blocking 30 min 或不blocking,一抗in 1% or 5%BSA RT 2hr, : : 二抗都是in 5%安佳,而BSA也用过sigma两种不同cat.来try,结果..................... : : .........都是一样的.......压了一个多小时.......有加刺激剂的都超淡淡淡淡淡淡 : : 不知道版上的各位..> <...可以提供小妹其它的做法....感激不尽!!!!!!! --

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