试试看Pierce的ECL NANO or Pico 不同细胞本来就不能比阿，表现量很可能不同， 多一点protein，换high sensitive ECL， 压片久一点， 然後去买好一点的X FILE， 加油吧！ ※ 引述《lorna184 (小宛)》之铭言： : > <....我的p-Akt一直跑不出来... : 希望版上的大大可以提供一下宝贵的意见 > < : 小妹原本用cell signal的p-Akt,但是压出来片子超乾净的说 : 後来再try几次,它终於有一点点出现(真的只是一点点),还压了一个多小时 : 以为抗体有问题,所以就try它们的positive control是有成功的 : 所以想说会不会因为所有的东西都是for它们的,所以买了abcam的抗体来try : 结果........是一样的,所以抗体方面是没问题的,但一点疑惑就是, : 两种抗体都是for human 和 mouse,我们用相同的条件做老鼠和人类 : 老鼠的band超明显,但是人类就不行了,接着就开始寻找问题, : 想说会不会是milk或是BSA的浓度太高,以至於把membrane的空缺都给补满了, : 所以抗体才抓不上去,原本用 5%安佳blocking 1hr,一抗(1:1000)in 5%BSA 4℃ overnight : ,二抗(1:1000)in 5%安佳 RT 1hr : 後来尝试 3%安佳blocking 30 min 或不blocking,一抗in 1% or 5%BSA RT 2hr, : 二抗都是in 5%安佳,而BSA也用过sigma两种不同cat.来try,结果..................... : .........都是一样的.......压了一个多小时.......有加刺激剂的都超淡淡淡淡淡淡 : 不知道版上的各位..> <...可以提供小妹其它的做法....感激不尽!!!!!!! -- 过去的来不及追忆 现在的赶不及接受 得到的不懂得珍惜 失去的无法能忘记 这就是生活吗？！ --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 61.230.6.237