作者lorna184 (小宛)
看板Biotech
标题Re: [求救] p-Akt
时间Fri Jul 4 15:10:59 2008
>推 lail:1抗浓度增加,再不行就试看看2抗o/n(浓度不变),参考参考罗^^ 07/04 12:34
>推 konlon:用用MILLIPORE的ECL市试试看 07/04 12:56
>推 tsubasawolfy:protein怎麽收的? 07/04 13:54
我是从fresh blood分离neutrophils,和刺激剂处理过细胞後,
离心,接着加入lysis buffer後,离心取上清液使用.
请问,会是我的sample制作的过程有问题吗??
>推 adagoddess:一抗 (1:500) over night,隔天回温久一点(2hr) 07/04 14:16
>→ adagoddess:Wash时间次数减少，二抗上久一点(2hr)。试试看吧 07/04 14:18
>推 liuse:你load多少protein 太少不行的 cell-type也有差 07/04 14:21
>→ liuse:cell signalling卖的很好用阿 我们这边也常用
我load 20 ug的protein
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.25.108.117
1F：推 tsubasawolfy:lysis完後sonication会更好ˊˇˋ 07/04 15:35
2F：→ lorna184:我有sonnicate 20w, 3sec, cycle 最小 07/04 15:38
3F：推 tsubasawolfy:那phosphatase inhibitor也有加@@? 07/04 15:40
4F：→ lorna184:恩恩...加了PMSF和两种sigma卖的cocktail 07/04 16:14
5F：推 adagoddess:增加protein的量试试看，20ug我个人认为不够， 07/04 19:33
6F：→ adagoddess:尤其又是压磷酸化的东西，多辛苦试试看吧～ 07/04 19:34
7F：推 liuse:用30ug试试看 然後压久一点 07/04 23:27