板上各位先进们好 有个关於浓缩管 amicon (10 kD cutoff) 的问题 虽然知道在浓缩的过程中 蛋白质会有一定程度的损失 但感觉在下的情况有点夸张 麻烦各位指正一下 原液 : 20 mM HEPES, 0.5 M NaCl, 250 mM imidazole (Ni column 纯化), pH 7.4 约放入 8 mL 进浓缩管 (CBG 染色, OD 595 ~ 1 左右) 3000 rpm, 30 mins, 4 度 C 浓缩成约 1 mL 再测浓缩管上层蛋白质的浓度 "仍跟原液一样" 测浓缩管下层 则无蛋白质存在 (membrane 应该没破) 将上层置换 buffer : 20 mM HEPES, 0.5 M KCl, pH 7.4 加到 15 mL 再浓缩一次至 1 mL 结果这次上层蛋白质所剩无几.....下层也是测不到蛋白质 请问在下的步骤 或是 buffer system 有互冲的问题吗 ? "理论上" 来说 在下的蛋白质浓度 应为原液的 8X 盐浓度应为 1/15 对吗 ? 感谢各位指教 ! -- --

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