作者crazyrange (热血羽球)
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标题[求救] DNA/RNA定量原理?
时间Fri Apr 25 16:42:52 2008
为了计算这个东西我查了一下网路
O.D = 浓度 x 消光系数(即DNA 20 ul/ug; RNA 25ul/ug)
换算回来就是 浓度= O.D x factor(即DNA 50 ng/ul;RNA 40 ng/ul)
以纯的DNA来说 用50 ng/ul纯DNA可以测到A260为1.0
以纯的RNA来说 用40 ng/ul纯RNA可以测到A260为1.0
我的问题出现了
因为RNA/DNA都是用A260测
那麽以纯的DNA测DNA A260可以得到1.0
那麽以纯的DNA测RNA A260的话同样也可以得到1.0
(因为她们都是用A260去测的)
可是明明就没有RNA 可是按照公式换算
1.0 x 40 ng/ul 还是可以计算的出RNA
这样不就变的很奇怪
一般我们萃取的RNA里面多少都会含有DNA
在那非纯的情况下(有RNA和DNA)
那麽A260所测得的吸光值是
浓度(DNA)x消光系数+浓度(RNA)x消光系数?
此外
吸光值是藉由硷基会吸收紫外光来测量
萃取RNA後为了排除DNA的污染
会使用DNase来破坏DNA成为oligo- or mono-nucleotide
可是在测量吸光值的时候necleotide还在
一样会被纳入吸光值里面
这样测起来浓度不就超不准
後我来想想DNase的目的只是避免RT的时候DNA也会被RT到
所以DNase只能解决这个问题,但浓度的问题还是在?
怎麽会这样?
因为我是自己查资料来学这部份的
可能很多人会是学长姐教导的
所以在学的时候,可能就不会去想这问题自然就接受了
可能是我比较刁钻吧.
不过,我想这应该算是个问题吧
烦请各位有经验的大大解解疑惑
感恩!感恩!
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 59.120.7.114
1F：推 dankai:所以有时候我们还是会再电泳一下做确认 04/25 17:00
2F：推 sima:应该是说NanoDrop里面测DNA或RNA的选项 其实只是帮你回推那个 04/26 00:00
3F：→ sima:factor的不一样而已 这样分不出里面究竟有多少的RNA或DNA 04/26 00:00
4F：→ sima:若要真的分开 或许可以用一些有选别性的萤光来定量 04/26 00:01
5F：→ sima:Invitrogen有出这样的kit 但是其实也不能完全分开就是了 囧~ 04/26 00:01
6F：推 freesoul:freesoul所以重点是抽的时候要乾净，抽完记得跑电泳 04/26 00:18