※ 引述《choyalove (我们说好了唷~)》之铭言： : [原因] : 实验的药物本身有颜色，在测定细胞存活率时候发现吸光值 : 异常高出control 组，怀疑是药物颜色残留而影响到的 : [步骤] : 我们实验室之前做 MTT 是 : 1. 种好细胞之後，培养24hr 让细胞贴附뀊: 2. 加药或是样品处理 : 3. 处理时间到达之後，吸除旧培养液 : 4. 加入 100 μl MTT 反应液 (0.5 mg/ml)，避光反应 1hr : 5. 移除 MTT 反应液，加入 100 μl DMSO : 6. 测波长 570nm 吸光 : 因为我样品本身就有颜色，加药时样品是以serium free DMEM 稀释 : 至作用浓度，虽然最後会移除掉含有样品的培养液，可是这几次数据 : 太诡异了，怀疑是不是我样品本身颜色残留而影响到後面 MTT 吸光... : 我自己考虑方法是: : 1. 作个对照组 : 但是我加 MTT反应液之前就会移除掉含有样品的培养液了 : 不知道样品颜色吸光对照要怎麽做比较好 : 2. 移除含有样品培养液之後，加 MTT 之前 : 加入一步 PBS wash 动作，可是我的细胞是 PC12，半贴附型不是贴很紧 : 我怕我多加洗的动作会造成细胞 loss 掉更多，误差更大 = = : 不知道大家在进行 MTT 时，碰到样品或药物本身颜色深긊: 有什麽可以建议吗？谢谢~ 可以试试看WST-1,XTT等其他试药会不会也起反应 嗯...如果你们实验室钱很多,可以任你try的话... 关於药品颜色干扰,应该在做中药吧? 猜的 建议你...带control进去! 除了没有细胞外,其他条件都设定一样(一样有加药,闭光,清洗~~等步骤喔!) 如果药物真的会干扰MTT,应该可以看到一个线性的趋势 再把实验组(有细胞的)的结果扣除,含药控制组的结果 这样就可以得到你要的东西啦~~ 最後,别忘了用trypen blue作确认~IC50 附近抓几个点来做做看 ^^ --

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