作者las1226 (las)
看板Biotech
标题Re: [问题] Transfection一直失败~~
时间Fri Sep 28 10:50:09 2007
※ 引述《chiehchieh (可不可以成熟点)》之铭言：
: ※ 引述《las1226 (las)》之铭言：
: : Transfect到HEK293
: : 我送的plasmid有0.4ug beta-gal和1ug 带有promoter的plasmid
: : 首先是lipofetamie和OPTI作用5min
: : 之後加入plasmid和OPTI和lipofetamine(in OPTI)作用20min
: : 就把他加入细胞中(cells in OPTI)
: : 8hr後换成DMEM(containing 10%FBS)
: : 再过40hr 收cell lysate
: : 可是最近几次实验都无法repeat出之前的结果
: : 连positive control和internal control感觉都测到background
: : 不晓得哪里有问题...难道是reagent吗?
: run DNA gel看你的plasmid有没有degraded
这我待会跑看看
: 8hr之後试试看不要换DMEM 改成用加的
有试加DMEM(containing 20%FBS)
: cell lysate收完了是直接做luciferase and b-galactosidase assay吗还是冰在-80??
: 冰在-80
cell confluency有达到80-90%当你做transfection的时候吗?
大约75%左右
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