请教各位高手 我最近在做双股DAN和一股oligonucleotide形成triplex DNA的实验 结果是要用EMSA的方式观察 如果成功的话 结果是triplex因为分子结构变大所以band会高於双股DAN的band 但是做了很多次 都没有做出triplex的结果出来 只看见双股的band 我有去查过一些文献的做法 目前已知要形成triplex必须在高Mg2+的离子浓度下 也不可以有K+的存在下 而我目前的的作法是 加入binding buffer和PCR合好的双股和oligonucleotide去反应24hr或48hr在室温 而binding buffer的成分是90mM tris-HCl,90mM boric acid, 10mM MgCl2,ph=7.4 由於我的oligonucleotide是purine组成的15mer(A,G rich) 所以paper有说ph值要在7.4的环境下 但是我这些都有做了 还是做不出结果出来 所以想请问有做过类似实验的高手们 在做双股DAN和一股oligonucleotide形成triplex DNA时binding是否还有需要注意的地方 例如是否要加热加速他们反应或是其他的详细条件 排版很乱 很抱歉 希望耐心的看完它 先在这说声谢谢了 感恩 <(_ _)> --

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