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标 题Re: [问题] 关於 yeast two-hybrid vector
发信站清华生命科学 BBS (Wed Jul 4 20:19:08 2007)
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※ 引述《[email protected] (苍天之月)》之铭言：
> 最近在接 yeast two-hybrid 用plasmid
> 用的vector是pGBKT7 7.3kb
> map:http://0rz.tw/9d2My
> 接一个1.2kb的insert 切位 pst1 bamH1
> PCR後单切 胶回收 再单切 再胶回收
> 接的时候先45度C Denature Vector insert
> 再跟据跑胶ban的亮度去决定比例
> total 20 ul
> 然後10~16度C 水浴 O/N
> 隔日transform到 DH5a 的E.coli中表现
> 讲了这麽多....反正就是接不进去
> 学长说可能是因为vector很长所以两端接不太到~~
> 有克服的方法吗??
你这是cloning的技术问题
可能原因太多
回答不完
不过很少会碰到vector太长的问题
应该是其他问题
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