作者u8524009 (VIP好人卡....)
看板Biotech
标题Re: [求救] 诱导表现蛋白质
时间Mon May 7 22:06:44 2007
※ 引述《Talen (找到答案了~)》之铭言：
: 最近正在做表现蛋白质的实验
: 利用pET30a接入欲表现的蛋白质(约30 KD)後
: 送入BL21(DE3)中 加入IPTG以诱导表现出蛋白
: 目前诱导表现情形很顺利 28度C 6小时
: 在破菌前有取 200 ul 确认过有诱导出来
: 但问题是每次在破菌後 我要表现的蛋白质会减少很多
: 不知道是什麽问题?
: 希望各位前辈能提供一些建议 感激不尽～
: 破菌的方法：
: Sonication 强度为３或４都用过 打十秒 停十秒 共１０分钟
: French press 使用大 Cell
: 但都依样结果
要先问一下你所谓的破菌後蛋白质少很多..是你用那一个fraction去跑胶得到的结果
不晓得你有没有测过你的目标蛋白质是soluble form还是inclusion body?
假设你的蛋白质是inclusion body,而你取上清液去跑胶;
亦或是你的蛋白质是soluble form,而你取离心後不溶的pellete去跑胶
都会得你像你所说的破菌後,蛋白质减少很多的现象
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◆ From: 140.114.96.172
1F：推 milkriver:inclusion body真的很难搞 囧 05/08 16:47