※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之铭言： : 请教各位先进 : 如果我把EGFP放进BL21 : IPTG induction後 : 可以纯化出一管会发萤光的蛋白质吗？ : 一时好奇......有人试过吗？谢谢？ (个人没有试过 不过 觉得这是一个很有趣的问题 可以当成思考练习:p) 可以先试想 eGFP是怎样的一个蛋白: 他与原始自然界水母的GFP有什麽不一样呢? 分子量非常大吗? 具有复杂的修饰 或是需要别的蛋白来帮它摺叠成正确的形状吗? 还是 需要经过别的酵素加工切成成熟的模样呢? 如果查不到资料呢 那换个角度想好了 eGFP可以做什麽研究? 很常见的用法之一 便是把他接在我们要看的蛋白上 可以不用经过繁琐的免疫萤光染色法 只要直接把表现细胞拿到萤光显微镜下一看 有绿没绿 有没有表现 一看就知道 还可以用Sorting的技术 来把表现量高的细胞挑出来 或是用Flow来定量 这是做蛋白质功能性研究很方便的一个工具 (就像是在满满的不好笑joke海里 可以轻松的靠m标记 来找出真正的笑点) 所以 eGFP不应该是一个很难做又很大的蛋白 不然 被我们强迫接上的目标蛋白 不就变成像是拖了铅球的囚犯 无法发会正常的功能了!! 罗哩罗唆嘴炮了这麽多 其实 eGFP能不能在细菌上表现 我们应该可以得到一个可靠的假设了 接下来 就是实验验证啦 那嚜 根据别人的实验结果 发现 运气很好的和我们的假设相符 细菌真的可以做出会亮的eGFP protein (原来的写法 好像不能表达真正想说的 修改了一下 实验中或是读paper的时候 常常会有很多的突发奇想 可以试着在查前人有没有动手验证过我的奇想前 先推论一下实验该如何做 或是 应该的结果 可以得到很多乐趣的~而且应该对於论文讨论的写作帮助很大:p) -- 虽然生物学的实验总是 总是 充满了 例外 意外 不知道为什麽和假设就是相反 不过 如果在每次提出问题 动手做之前 都能先想清楚原因推论 或许可以少走很多冤枉路^^ (这是以前听一个老师说的:p) -- --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 123.193.28.105 ※ 编辑: JeffreyS 来自: 123.193.28.105 (03/25 00:26)