作者fjubiology (Proposal结束)
看板Biotech
标题Re: [问题]不同的细胞固定方法
时间Fri Apr 14 23:57:52 2006
※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言：
: 想问 PFA 跟 有机溶剂固定之间的差异
: 我的认知是有机溶剂比较适合 cytoskeleton 的固定
: 有些细胞质内的蛋白质则可能会扩散或流失掉
: PFA 的固定则似乎没有那麽"牢" 经验上总绝得细胞比较容易浮起来
: 想请问 如果是单纯要看 GFP / EGFP, 是否可以用有机溶剂来固定呢？
: 又，如果是带 GFP 的 fusion protein,
: 是否有什麽法则预先判断是否适合使用有机溶剂固定？
以我以前作粒线体蛋白萤光染色，建议用3.7 %的PFA pH 7.，通常我都是用medium固定。
PFA加热後会偏硷，所以通常我都把STOCK的PFA调成 pH 3~4左右，跟MEDIUM混完後
pH大概是7左右，刚刚好不会使细胞/粒线体变形。固定时间约为15～30分，室温。
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织田信长：「杜鹃不叫，我杀了牠！」
丰臣秀吉：「杜鹃不叫，我想办法让牠叫！」
德川家康：「杜鹃不叫，我等牠叫！」
Angus Tzeng：「杜鹃不叫，我自己叫！XD」
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