作者pj0611 (shoot the moon)
看板Biotech
标题Re: [问题] 有关plasmid
时间Wed Apr 12 14:17:01 2006
※ 引述《oscarcc (捕捉属於自己的梦)》之铭言:
: ※ 引述《Aqqqa (没有昵称)》之铭言:
: : 这边该想一个问题
: : 抽取genomic DNA时会不会抽到plasmid?
: : 抽取plasmid DNA时, 那genomic DNA是在哪一步骤去掉的?
: 如果你是用加入solution I, II, III的方法,最後在solutionIII後,
: 会有混浊的渣渣和下面比较澄清的液体,离心之後,渣渣里面包含菌体的残骸及
: genomic DNA,而澄清液里面就含有你要的plasmid DNA
: (主要是利用Solution II里面的强硷将DNAdenature, 而Soluion III的醋酸将
: DNA renature)
: : 总不能加DNase吧
: : 抽取plasmid DNA时不能vortex主要是避免genomic DNA被弄断
: : 这样会有小片段的形成, 就不能在之前的步骤和蛋白质一起被沉淀去除掉
: : 至於plasmid DNA extraction技术再怎麽好
: : 大多还是三种forms会出现
补充一下
当醋酸快速的renature DNA的时候
因为plasmid DNA的片段小所以可以快速且整齐的黏合回来
而genomic DNA由於片段很大故会有很多硷基匆忙配对而形成一个大分子
对水的溶解度差而在离心的时候会被沈淀下来
因此而可以将genomic DNA和plasmid DNA分开
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