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标 题Re: [问题] 我的plate让我很像cloning菜鸟…
发信站不良牛牧场 (Tue Mar 28 19:25:28 2006)
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※ 引述《[email protected] (其实是水桶腰)》之铭言:
: 做cloning做那麽久了,第一次觉得自己像个什麽都不知道的菜鸟…
: 事情是这样的,我做subcloning,直接拿ligation reaction去transform,
: 用的是DH5a, heat-shock 2 min, recover 50 min,
: 长在LB/ampicillin plate(100 ug/ml)上,
: 过了20小时(是的,有点久…我认错…)去收,
: 结果发现plate上很多colony都一大坨 水水的,
: 以前有一次做TA cloning也这样(那时是16小时去收),
: 不过那次有做蓝白筛选,所以我挑看起来长得像colony的东西去养、去切,
: 6颗里面有4颗是对的…
: 重点是,
: 如果是incubate太久,不是都会有satellite现象吗?
: 这样子"水水的"的现象是什麽造成的?
: 是plate太湿吗?(我在plating之前有在hood开一点点吹个十分钟)
: 感谢版上达人解惑~
: 有图有真相:http://www.wretch.cc/album/blackhottie
你的plate是放在37℃的incubator吗?
我们实验室通常会把plate用倒放的方式incubate for overnight
如此一来可以避免产生水气而影响colony的生长
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1F:推 chiasaiqueen:是滴,倒扣37度c…确定乾了以後再拿去incubate的… 03/28 20:14