作者euphonium15 (心動夢幻)
看板PhD
標題[實驗] 電泳膠體的製備
時間Fri Mar 25 01:31:12 2011
※ [本文轉錄自 Chemistry 看板 #1DYt3U7g ]
作者: euphonium15 (心動夢幻) 看板: Chemistry
標題: [實驗] 電泳膠體的製備
時間: Fri Mar 25 00:27:08 2011
原PO的領域不是做電泳相關研究~
電泳實驗也從來沒有碰過~更不用說要製備膠體Orz
如今碰到了一點問題~想來詢問有經驗的板友~
詳情如下:
原PO前幾天接獲老板指示要根據一篇文獻製作Diffusive Gels出來~
看了一下所需要的藥品~
1. Acrylamide
2. Agarose cross-linker
3. Ammonium persulfate
4. TEMED
上網查了一些資料~發現似乎跟跑電泳用的膠體類似~
根據文獻~原PO使用了下面的步驟:
1. 25mL 15% Acrylamide+7.5mL 0.3% Agarose+ 17.5mL DI Water當stock solution.
2. 取10mL stock solution加入70uL Ammonium persulfate以及20uL TEMED充分混合.
3. 裝入holder後,迅速放入約40度左右的烘箱約60分鐘.
理論上出來的應該是跟果凍一樣的膠體才對~不過原PO做出來的應該只能說是膠水Orz
不知道是哪裡出了問題~理論上應該跟文獻有一樣的結果才對~
自己的猜測:
1. 因為使用的藥品跟文獻的廠牌不一樣,導致成膠的能力也會略有差異?
如果是這樣的話,是否加入多一點Ammonium persulfate或是TEMED可以改善呢?
2. 因為文獻製作出來的Diffusive Gels厚度只有0.4mm之間.
原PO只是先行測試成膠的能力,因此只是大概找個holder讓它成形而已.
厚度大概有1-2mm左右,不知道厚度會不會影響到成膠的能力?
3. 此外文獻為了讓gel成形,使用了兩片玻璃將其夾住後再放入烘箱.
原因同2.一樣,原PO只是先行測試成膠的能力好壞,並沒有這樣處理.
不知道這會不會也是關鍵的因素之一呢?
希望有經驗的板友可以給點意見~總比一個人在那瞎子摸象好XD
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 114.37.164.133
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1F：→ puec2:缺了bis-acrylamide 03/25 01:33
相關文獻上主要是用Agarose來使用.
當然也有人使用Bis-acrylamide.
我所參考的文獻是使用Agarose.
2F：推 YuChHa:Diffusive Gels 好古老的技術 他是水水的沒錯 03/25 01:53
不瞞您說,這技術全名是Diffusive Gradients in Thin-films.
老實說也已經有商業化產品出來,自己手上就有幾個@@"
拆開來看過,裡面的gel是有點像隱形眼鏡那樣,可以夾起來.
3F：推 HOPEFIRE:應該會有膠吧 但是這樣你沒有buffer不控制pH嗎?? 03/25 03:15
有膠產生,不過是膠水的感覺,不需要控制pH值.
4F：推 missal:ammonium persulfate不新鮮可能會不凝 03/25 08:42
為了這實驗,所有藥品都是全新購買,APS當然也是現配現做.
5F：推 killua1:我們家做膠不會放烘箱耶 = = 不是室溫就會凝了嗎... 03/25 11:28
我在猜放烘箱可能是需要使其完全反應之類.
※ 編輯: euphonium15 來自: 140.114.45.130 (03/25 14:49)
6F：→ rai1209:我都是用bis做的，厚薄沒有影響，APS及TEMED適量就好 03/25 15:45
7F：→ rai1209:加太多硬度會降低。你APS的濃度? 或者是要不要試試先degas 03/25 15:46
8F：→ rai1209:我都是用10%APS10ul TEMED2ul / ml total 03/25 15:48
APS也是10%的濃度,按照文獻的比例應該是APS 7uL TEMED 2ul / mL.
※ 編輯: euphonium15 來自: 140.114.45.130 (03/25 16:12)
9F：→ puec2:我有看到你那篇文獻耶 03/25 16:37
Anal. Chem. 1995, 67,3391 -3400
※ 編輯: euphonium15 來自: 140.114.45.130 (03/25 16:41)