作者euphonium15 (心动梦幻)
看板PhD
标题[实验] 电泳胶体的制备
时间Fri Mar 25 01:31:12 2011
※ [本文转录自 Chemistry 看板 #1DYt3U7g ]
作者: euphonium15 (心动梦幻) 看板: Chemistry
标题: [实验] 电泳胶体的制备
时间: Fri Mar 25 00:27:08 2011
原PO的领域不是做电泳相关研究~
电泳实验也从来没有碰过~更不用说要制备胶体Orz
如今碰到了一点问题~想来询问有经验的板友~
详情如下:
原PO前几天接获老板指示要根据一篇文献制作Diffusive Gels出来~
看了一下所需要的药品~
1. Acrylamide
2. Agarose cross-linker
3. Ammonium persulfate
4. TEMED
上网查了一些资料~发现似乎跟跑电泳用的胶体类似~
根据文献~原PO使用了下面的步骤:
1. 25mL 15% Acrylamide+7.5mL 0.3% Agarose+ 17.5mL DI Water当stock solution.
2. 取10mL stock solution加入70uL Ammonium persulfate以及20uL TEMED充分混合.
3. 装入holder後,迅速放入约40度左右的烘箱约60分钟.
理论上出来的应该是跟果冻一样的胶体才对~不过原PO做出来的应该只能说是胶水Orz
不知道是哪里出了问题~理论上应该跟文献有一样的结果才对~
自己的猜测:
1. 因为使用的药品跟文献的厂牌不一样,导致成胶的能力也会略有差异?
如果是这样的话,是否加入多一点Ammonium persulfate或是TEMED可以改善呢?
2. 因为文献制作出来的Diffusive Gels厚度只有0.4mm之间.
原PO只是先行测试成胶的能力,因此只是大概找个holder让它成形而已.
厚度大概有1-2mm左右,不知道厚度会不会影响到成胶的能力?
3. 此外文献为了让gel成形,使用了两片玻璃将其夹住後再放入烘箱.
原因同2.一样,原PO只是先行测试成胶的能力好坏,并没有这样处理.
不知道这会不会也是关键的因素之一呢?
希望有经验的板友可以给点意见~总比一个人在那瞎子摸象好XD
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.37.164.133
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 114.37.164.133
1F：→ puec2:缺了bis-acrylamide 03/25 01:33
相关文献上主要是用Agarose来使用.
当然也有人使用Bis-acrylamide.
我所参考的文献是使用Agarose.
2F：推 YuChHa:Diffusive Gels 好古老的技术 他是水水的没错 03/25 01:53
不瞒您说,这技术全名是Diffusive Gradients in Thin-films.
老实说也已经有商业化产品出来,自己手上就有几个@@"
拆开来看过,里面的gel是有点像隐形眼镜那样,可以夹起来.
3F：推 HOPEFIRE:应该会有胶吧 但是这样你没有buffer不控制pH吗?? 03/25 03:15
有胶产生,不过是胶水的感觉,不需要控制pH值.
4F：推 missal:ammonium persulfate不新鲜可能会不凝 03/25 08:42
为了这实验,所有药品都是全新购买,APS当然也是现配现做.
5F：推 killua1:我们家做胶不会放烘箱耶 = = 不是室温就会凝了吗... 03/25 11:28
我在猜放烘箱可能是需要使其完全反应之类.
※ 编辑: euphonium15 来自: 140.114.45.130 (03/25 14:49)
6F：→ rai1209:我都是用bis做的，厚薄没有影响，APS及TEMED适量就好 03/25 15:45
7F：→ rai1209:加太多硬度会降低。你APS的浓度? 或者是要不要试试先degas 03/25 15:46
8F：→ rai1209:我都是用10%APS10ul TEMED2ul / ml total 03/25 15:48
APS也是10%的浓度,按照文献的比例应该是APS 7uL TEMED 2ul / mL.
※ 编辑: euphonium15 来自: 140.114.45.130 (03/25 16:12)
9F：→ puec2:我有看到你那篇文献耶 03/25 16:37
Anal. Chem. 1995, 67,3391 -3400
※ 编辑: euphonium15 来自: 140.114.45.130 (03/25 16:41)