※ [本文轉錄自 Biotech 看板] 作者: EsMirada (esmirada) 看板: Biotech 標題: Re: [問題] SDS-PAGE跑膠 很多問 時間: Sat Sep 16 16:10:57 2006 ※ 引述《leondemon (狗狗)》之銘言： (friendly delete) : 目前問題: : 1.我的marker完全沒有分層，可是我有放別人的marker，可以看到不同顏色的Band : 是不是我的marker有問題，還是我買錯了?(什麼是prestained marker) prestained marker已有版友回答.. 至於你的marker沒有分層會不會是因為不是prestained所以必須要染色才看的到 你看的到沒有分層可能是小分子dye : 2.第一次製膠時，感覺膠體作的不是很好，雖然膠片有凝結，但是tube內的沒有 : 後來跟別人借Acry/Bis來重新配，也用自己的Acry/Bis配一管，兩管都有凝在Tube : 但是感覺我的凝膠表面不是水平狀，但是別人的Acry/Bis配的，表面很平 你的表面指的是鑄膠的表面還是tube表面? 若是鑄膠表面記得runnung gel做好要壓水才會平..還有AP及TEMED的量加少一點 讓它凝固的時間增加也有助於膠體的平整 另外如果你指的是tube表面的話那當然是不平的 還有AP與空氣接觸會導致自由基失效膠凝不起來 所以你第一次鑄膠tube裡頭沒有凝固可能是有搖晃到..所以別太擔心 : 3.在stacking時，每條lane的dye都會越來越胖， : 隨著時間流逝，別人家的marker，band呈梯形狀，這樣正常嗎? 你所謂的梯形是指smile形狀嗎?通常這個現象會產生的原因是 well兩邊的散熱較快中間較慢..所以中間的溫度較高protein跑的比較快所造成 如果是反過來的梯形那我就不知道是什麼因素..沒有看過這樣的形狀 : 4.APS粉末能否放在室溫?? : 藥劑/藥品在配置上和保存上有哪些要注意的?? 已有板友回答..AP盡量維持新鮮現配，注意照光勿太強放在室溫是沒有問題的 : 麻煩各位前輩幫忙了~ 有關SDS-PAGE原理可以參考這個網站寫的非常詳細 http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/gellab2.html 以上有錯誤請指教 另外祝你實驗順利:) --

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