※ [本文转录自 Biotech 看板] 作者: EsMirada (esmirada) 看板: Biotech 标题: Re: [问题] SDS-PAGE跑胶 很多问 时间: Sat Sep 16 16:10:57 2006 ※ 引述《leondemon (狗狗)》之铭言： (friendly delete) : 目前问题: : 1.我的marker完全没有分层，可是我有放别人的marker，可以看到不同颜色的Band : 是不是我的marker有问题，还是我买错了?(什麽是prestained marker) prestained marker已有版友回答.. 至於你的marker没有分层会不会是因为不是prestained所以必须要染色才看的到 你看的到没有分层可能是小分子dye : 2.第一次制胶时，感觉胶体作的不是很好，虽然胶片有凝结，但是tube内的没有 : 後来跟别人借Acry/Bis来重新配，也用自己的Acry/Bis配一管，两管都有凝在Tube : 但是感觉我的凝胶表面不是水平状，但是别人的Acry/Bis配的，表面很平 你的表面指的是铸胶的表面还是tube表面? 若是铸胶表面记得runnung gel做好要压水才会平..还有AP及TEMED的量加少一点 让它凝固的时间增加也有助於胶体的平整 另外如果你指的是tube表面的话那当然是不平的 还有AP与空气接触会导致自由基失效胶凝不起来 所以你第一次铸胶tube里头没有凝固可能是有摇晃到..所以别太担心 : 3.在stacking时，每条lane的dye都会越来越胖， : 随着时间流逝，别人家的marker，band呈梯形状，这样正常吗? 你所谓的梯形是指smile形状吗?通常这个现象会产生的原因是 well两边的散热较快中间较慢..所以中间的温度较高protein跑的比较快所造成 如果是反过来的梯形那我就不知道是什麽因素..没有看过这样的形状 : 4.APS粉末能否放在室温?? : 药剂/药品在配置上和保存上有哪些要注意的?? 已有板友回答..AP尽量维持新鲜现配，注意照光勿太强放在室温是没有问题的 : 麻烦各位前辈帮忙了~ 有关SDS-PAGE原理可以参考这个网站写的非常详细 http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/studies/sds-page/gellab2.html 以上有错误请指教 另外祝你实验顺利:) --

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