好久沒發，開學也一段時間了，來打一下我負責的實驗好了 我們實驗室是做HCV的(C肝) 我主要看的部分是關於C肝蛋白跟細胞貼附相關蛋白的作用 雖然有人發過這樣的paper了 但是他們是利用Y2H的方式做大量掃描 而我是利用IP的方式證明 而IP跟Y2H的優缺點自己孤狗一下巴 所以開始要contruct 每個細胞貼附蛋白 的plasmid 所接上的vector後面會表現兩種tag(V5 and polyHis) 為啥要這樣的原因 則是這樣可以不用買專門壓特定蛋白的抗體(抗體很貴滴) 可以直接利用壓V5 or His的抗體來達成你的觀測目的 而我建立的方式算是第二簡單的只要PCR出來在切RE後接上去就好了 最簡單應該是直接切不用P就可以接了 要P在切的話通常是在primer上有設計切位要考慮有沒有in frame(這個以前有教過喔) 有些實驗室會利用taq的特性在P完後接到別的質體在切(ex pGEM 的TA vector) 這樣其實比較好，也有可能比較快 像我那樣做(P完純化產物後切RE)會面對的問題 就是你可能切完兩刀要接進去的時候發現你的insert的濃度很低= = 所以你就要在P一次在切一次 但是你如果先接到別的質體，你就只要養菌 在切就可以拿到足夠的量 之後做好之後 就要做Transfection (跟transformation是不一樣滴 別說你忘了XD) 通常可以直接利用liposome(kit)來做 但是它很貴就是了= = 所以我是用Calcium phosphate + BBS的方式 有人是用HIPS(不確定是不是這樣拼)不過學長試過效率很差就是了 有人有效率高的HIPS protocol 可以提供給我嗎XDD 之後就收細胞lysis 去跑SDS PAGE看你transfect進去protein的表現量 如果OK的話 就要做co transfection(就是同時送兩個or兩個以上的質體) 我的話就是其中一個細胞黏附蛋白 + 認為會有interaction的HCV Protein進去 不過就今天我去壓片子的結果 果然沒那麼好弄 ╮(╯_╰)╭ 不過反正我的時間還長的哩 就慢慢try condition瞜 ===========================以下是條列式閒聊和笨點============================= 1. 台北最一直在下雨 不過都是小雨 天氣也變冷了 我已經把冬天的棉被拿出來了說 不過好像不是全台都那樣 南部好像還是好天氣 而東部那天竟然下雨下到淹水 這是怎了= = 台灣還能住人嗎!! 2. 下禮拜有微免所的六校聯誼 不知道回不會看到宣榮和思碩啊XDD 雖然說我不打桌球跟籃球 而且比賽是同時開始的樣子 希望可以看到老同學啊ㄎㄎ 3. 剛剛要去洗澡的時候 想說要帶本死亡筆記本進去看 結果...... 結果...... 結果...... 他被我失手丟到馬桶裡了啊啊啊啊啊 今天才在笨版看到類似的人做這種事 就發生在我身上了啦 T______T 雖然說裡面沒有屎尿 但還是覺得很噁心啊 T _____ T ================以上是最近的流水帳，下次發文時間待商確XDDDD==================== --

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