好久没发，开学也一段时间了，来打一下我负责的实验好了 我们实验室是做HCV的(C肝) 我主要看的部分是关於C肝蛋白跟细胞贴附相关蛋白的作用 虽然有人发过这样的paper了 但是他们是利用Y2H的方式做大量扫描 而我是利用IP的方式证明 而IP跟Y2H的优缺点自己孤狗一下巴 所以开始要contruct 每个细胞贴附蛋白 的plasmid 所接上的vector後面会表现两种tag(V5 and polyHis) 为啥要这样的原因 则是这样可以不用买专门压特定蛋白的抗体(抗体很贵滴) 可以直接利用压V5 or His的抗体来达成你的观测目的 而我建立的方式算是第二简单的只要PCR出来在切RE後接上去就好了 最简单应该是直接切不用P就可以接了 要P在切的话通常是在primer上有设计切位要考虑有没有in frame(这个以前有教过喔) 有些实验室会利用taq的特性在P完後接到别的质体在切(ex pGEM 的TA vector) 这样其实比较好，也有可能比较快 像我那样做(P完纯化产物後切RE)会面对的问题 就是你可能切完两刀要接进去的时候发现你的insert的浓度很低= = 所以你就要在P一次在切一次 但是你如果先接到别的质体，你就只要养菌 在切就可以拿到足够的量 之後做好之後 就要做Transfection (跟transformation是不一样滴 别说你忘了XD) 通常可以直接利用liposome(kit)来做 但是它很贵就是了= = 所以我是用Calcium phosphate + BBS的方式 有人是用HIPS(不确定是不是这样拼)不过学长试过效率很差就是了 有人有效率高的HIPS protocol 可以提供给我吗XDD 之後就收细胞lysis 去跑SDS PAGE看你transfect进去protein的表现量 如果OK的话 就要做co transfection(就是同时送两个or两个以上的质体) 我的话就是其中一个细胞黏附蛋白 + 认为会有interaction的HCV Protein进去 不过就今天我去压片子的结果 果然没那麽好弄 ╮(╯_╰)╭ 不过反正我的时间还长的哩 就慢慢try condition瞜 ===========================以下是条列式闲聊和笨点============================= 1. 台北最一直在下雨 不过都是小雨 天气也变冷了 我已经把冬天的棉被拿出来了说 不过好像不是全台都那样 南部好像还是好天气 而东部那天竟然下雨下到淹水 这是怎了= = 台湾还能住人吗!! 2. 下礼拜有微免所的六校联谊 不知道回不会看到宣荣和思硕啊XDD 虽然说我不打桌球跟篮球 而且比赛是同时开始的样子 希望可以看到老同学啊ㄎㄎ 3. 刚刚要去洗澡的时候 想说要带本死亡笔记本进去看 结果...... 结果...... 结果...... 他被我失手丢到马桶里了啊啊啊啊啊 今天才在笨版看到类似的人做这种事 就发生在我身上了啦 T______T 虽然说里面没有屎尿 但还是觉得很恶心啊 T _____ T ================以上是最近的流水帐，下次发文时间待商确XDDDD==================== --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 124.8.106.248