未知菌種的鑑定 a. TSI agar slant (P59) 功能:1.辨別微生物醣類發酵的差異2.產生H2S的能力 分斜面及底部 只用glucose---迳底部酸性(黃色) ---迳斜面鹼性(橘紅色) 能用乳糖或蔗糖-迳斜面and底部均酸性(黃色) 不用任何糖-迳均鹼性(橘紅色) 能生成H2S-迳底部有黑色硫化亞鐵沉澱 菌種們: (都是plate) Escherichia coli大腸桿菌 E.coli 底部呈紅色，斜面呈黃色。(有點怪) 不能生成H2S。 Pseudomonas aeruginosa 綠膿桿菌 全部都呈現紅色，因此不會利用葡萄糖、乳糖和蔗糖。不能生成H2S。 Shigella flexneri 志賀氏桿菌 全部都呈現紅色，不會利用葡萄糖、乳糖和蔗糖。 (煥基看到的是:斜面紅色、底部黃色。我認為其只利用葡萄糖。也是不能生H2S) Salmonella Typhimurium 沙門氏鼠傷寒桿菌 會產生H2S(底部有黑色硫化亞鐵沉澱)。 不會利用葡萄糖、乳糖、蔗糖。均鹼性(橘紅色) Alcaligenes faecalis: 糞產堿菌 底部呈紅色，斜面呈黃色。(怪怪的)。不能生成H2S。 Proteus vulgaris 普通變型桿菌 全部都呈現黃色， 會利用乳糖和蔗糖，但不會產生H2S。 b. Litmus milk石蕊乳試驗 (p64) 功能:了解微生物1.乳酸發酵2.產氣3.石蕊的還原反應4.乳凝塊形成5.蛋白質分解6.鹼反 應 1.乳糖發酵:乳糖 (紫色) 迳 葡萄糖+半乳糖 迳 乳酸(粉紅色) 2.氣體的產生:細菌發酵乳糖最終產物有時是CO2或H2 在牛乳培養基中，牛乳因酸變 成固體，若有氣體產生可看到固態牛乳撕裂產生空隙。 3.石蕊的還原反應: 若無氧當氫離子接收者 石蕊(紫色)迳無色OR牛乳色 4.乳凝塊形成 硬性凝塊 軟性凝塊(細菌產生凝乳酵素) 5.水解蛋白質及鹼性反應 細菌水解牛乳內蛋白質-迳培養基呈鹼性迳石蕊指示劑呈現深紫色 AND培養基乳漿狀 菌種們: Escherichia coli大腸桿菌(P59) 呈淡粉紅色，因此E.coli 可以進行乳糖發酵，而且有硬性凝塊產生， Alcaligenes faecalis: 糞產堿菌(P59) 紫色 Lactococcus lactis ATCC 11454 其他組別的L.lactis ATCC 11454 都有出現明顯顏色變 化和凝塊出現，應該是我們的L.lactis ATCC 11454 沒有接種成功。(怪怪的) Pseudomonas aeruginosa 綠膿桿菌(P59) 紫色 C.SIM deep(p67，p61) 功能:1.測定微生物分解tryptophan的能力(藉由indole和Kovac試劑的反應) 如果上層呈紅色迳 indole-positive 2.測定微生物產生H2S的能力，和微生物在SIM培養基的mobility。 菌種們:(都是plate) Enterobacter aerogenes 產氣腸桿菌 不會產生硫化氫，而且不具有運動性。 不可分解tryptophan(上層沒紅色) Salmonella Typhimurium 沙門氏鼠傷寒桿菌 ( p59) 會產生硫化氫，而且具有運動性。(沒有做indole試驗) Klebsiella pneumonia 克雷白氏肺炎菌 不會產生硫化氫，但具有一點點運動性。 --------------------------實驗二十六 ------------------------------------------------- Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64) 可分解tryptophan(上層呈紅色) 不具運動性 Proteus vulgaris 普通變型桿菌(p59) 可分解tryptophan(上層呈紅色) 具運動性 Enterobacter aerogenes 產氣腸桿菌(上面就有了) 不可分解tryptophan(上層無紅色) 不具運動性 D.Tryptic nitrate broth (p71) 功能:測試微生物還原nitrate的能力 NO3- + 2H+ + 2e- NO2- +H2O Nitrate 還原 Nitrite+(reagent A and reagent B變紅色) 有些細菌會把NO2-變成 N2 (無色) NO3- N2 都是無色傻傻分不清楚故加入Zn(請記住是加到無色的試管喔) 加入Zn後變紅色，代表此細菌無法還原NO3- 陰性 若加入Zn後無色，代表此細菌可以還原NO3- 陽性 細菌們:(都是plate) Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61) E.coli 加入solution 後的結果，變成紅色，表示E.coli 可以將nitrate 還原成nitrite。 Alcaligenes faecalis: 糞產堿菌(P59 64) 一開始加入reagent A and reagent B呈無色，加入Zn後呈紅色表示 牠是陰性。 Pseudomonas aeruginosa 綠膿桿菌(P59 64) 一開始加入reagent A and reagent B呈無色，加入Zn後仍呈無色，表示P.aeruginosa 可 將nitrate 還原成氮氣。 E .MR-VP broth(p68) 功能:測定微生物氧化葡萄糖而產酸的能力 E.coli將葡萄糖分解產生酸-----迳甲基紅呈紅色(陽性) E.aerogenes會繼續將此酸性產物分解成非酸性產物---迳甲基紅呈黃色(陰性)+Barritt’ s試劑-迳變紅色 細菌們:(都是plate) Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61 71) E.coli， Methyl red test 的結果呈紅色，表示E.coli 可以將葡萄糖分解而產酸。 Voges-Proskauer test 的結果，E.coli，呈黃色。 Enterobacter aerogenes 產氣腸桿菌(p67 71) Methyl red test 的結果，E.aerogenes，呈橘色 Voges-Proskauer test 的結果，E.aerogenes，呈紅色，表示E.aerogenes 可以將葡萄糖 分解而產酸，再繼續分解成非酸物質。 F.Simmons citrate agar slant(p69) 功能:鑑別各種腸內菌是否可利用citrate為唯一碳源 Bromthymol blue指示劑從綠色迳深藍色(陽性) 菌種們: Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61 71 68) E.coli，呈綠色 Enterobacter aerogenes 產氣腸桿菌(p67 71 68) E.aerogenes，呈藍色，表示E.aerogenes 可以利用citrate 作為碳源。 G.尿素酶試驗(p63) 功能:若微生物可分解尿素迳使酚紅變深紅色 細菌們: Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61 71 68 69) E.coli 不會分解尿素 Proteus vulgaris 普通變型桿菌(p59 67 61) P.vulgaris 會分解尿素所以成紅色 H.Trypticase soy agar slant(p31) I. Tributyrin agar plate(p56) 功能:lipid hydrolysis Triglyceride tributyrin在水溶液中呈現乳濁狀，若細菌分泌脂肪酶則可將之分解成水 溶性之酪脂酸及甘油迳在菌落周圍乳濁狀消失，產生清澈區域。 菌種們: Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61 71 68 69 63) Bacillus cereus 仙人掌桿菌 呈現糊糊的樣子 Pseudomonas aeruginosa 綠膿桿菌(P59 64 71) 有顏色變化 Staphylococcus aureus 金黃色葡萄球菌 J.Milk agar plate(p56) 功能:測試微生物可不可以分泌蛋白酶 菌種們: Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61 71 68 69 63 56) Bacillus cereus 仙人掌桿菌(p56) 可以產生蛋白酶。 Pseudomonas aeruginosa 綠膿桿菌(P59 64 71 56) 可以產生蛋白酶。 Staphylococcus aureus 金黃色葡萄球菌(p56) K.MacConkey agar plate(p29) 功能:革蘭氏陽性菌會被抑制生長 細菌分解乳糖產生酸，使酸鹼指示劑呈紅色。 菌種們: Escherichia coli大腸桿菌(P59 、64 67 61 71 68 69 63 56) 紅色一片迳革蘭氏陰性菌且能分解乳糖 Staphylococcus aureus 金黃色葡萄球菌(p56) 是革蘭氏陽性菌，被抑制生長。 Enterobacter aerogenes 產氣腸桿菌(p67 71 68 69) 紅色一片迳革蘭氏陰性菌且能分解乳糖 Salmonella Typhimurium 沙門氏鼠傷寒桿菌 白色一片迳革蘭氏陰性菌但不能分解乳糖 大家期末加油!! 二一的路上沒你沒我 --

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