一、是非題 在鹼溶裂法中，solution I、II、III中各成分的作用 (X)(1)EDTA可以移除1價離子 (O)(2)SDS的作用是使細胞膜變性 (X)(3)醋酸可以使DNA denature (O)(4)NaOH可以使DNA denature (O)(5)Tris-HCl(pH8.0)可以使溶液維持酸鹼度 二、選擇題 (ACD)1.下列何者是在使用pipetman時不可做的動作? (A)使用時要快吸取buffer，避免buffer變性 (B)使用完要條回最大吸收值 (C)為了省錢，tip尖端碰到東西還是要繼續使用 (D)將pipetman歸零意指將pipetman數值調成0 (E)避免把pipetman倒置 ( B )2.Phage侵入宿主的步驟 1.Maturation 2.Adsorption 3.Peneration 4.Release 5.Replication 請選出正確順序 (A)1->2->3->4->5 (B)2->3->5->1->4 (C)2->5->1->3->4 (D)3->2->5->1->4 ( B )3.在plaque實驗中，E.coli與medium的比值是多少? (A)1:10 (B)1:100 (C)1:1000 (D)1:10000 ( C )4.下列哪個選項是plaque實驗中不會用到的? (A)top agar (B)IPTG (C)EtBr (D)NaCl ( C )5.下列哪個選項是plaque實驗中計算力價的公式? (A)Pfu/L = 溶菌斑數目 / 稀釋倍數 (B)Pfu/ml = 溶菌斑數目 / 稀釋次數 (C)Pfu/ml = 溶菌斑數目 / 稀釋倍數 (D)Pfu/ml = 菌落數目 / 稀釋倍數 ( B )6.在plaque實驗中，day one的E.coli需養至O.D.多少? (A)0.4~1.0 (B)0.5~1.0 (C)overnight (D)依自己喜好 ( D )7.下列哪個選項是plaque實驗中所使用的phage與E.coli品系? (A)M13與ES2738 (B)T4與BHK (C)T13與ER2738 (D)M13與ER2738 ( A )8.下列哪些試劑含有EDTA(ethylenediaminetetraacetic acid)? (A)Solution I(質體萃取) (B)PCR的reaction buffer (C)Solution III(質體萃取) (D)Solution II(質體萃取) ( E )9.Taq polymerase是從細菌所分離出來，請問此細菌最先是由何地取得? (A)敦煌莫高窟 (B)侏儸紀公園 (C)馬達加斯加 (D)大峽谷公園 (E)黃石國家公園 (F)死海 (G)義大利維蘇威火山 (H)直布羅陀海峽 (I)深海的火山噴發口 ( A )10.請問下列何者不是萃取質體的方法? (A)超音波法 (B)沸騰法 (C)鋰鹽法 (D)鹼溶裂法 三、填充題 請寫出下列的pipetman各是顯示吸取多少體積溶液(需寫出單位) P200 P20 P200 P20 P1000 ┌─┐ ┌─┐ ┌─┐ ┌─┐ ┌─┐ │1 │ │0 │ │3 │ │1 │ │6 │ ├─┤ ├─┤ ├─┤ ├─┤ ├─┤ │5 │ │8 │ │7 │ │5 │ │9 │ ├─┤ ├─┤ ├─┤ ├─┤ ├─┤ │6 │ │5 │ │0 │ │6 │ │0 │ └─┘ └─┘ └─┘ └─┘ └─┘ (156ul)(8.5ul) ( X ) (15.6ul)( X ) 四、簡答題 1.請簡述鹼溶裂法如何把質體和染色體分開? Ans:利用含SDS的鹼性溶液處理細胞。SDS可將細胞膜打破，而鹼會破壞DNA的氫鍵 導致DNA變性(由雙股變為單股)，再加入酸性溶液中和使單股DNA回復為雙股DNA。 在急速中和反應下，染色體DNA因分子龐大鹼基匆忙配對形成一雜亂無序的巨大分子 對水溶解度相對較低。而質體DNA因分子小，兩單股鹼基恢復配對快，對水溶解度 相對較高，因此經過離心後即可將染色體DNA與質體DNA分離 2.請問用EtBr染色完之後要如何觀察才會使EtBr發出螢光? Ans:在紫外燈下觀察 3.請問IPTG的功能為? Ans:誘導細菌表現其蛋白質 4.有四段DNA，分別是200bp、300bp、700bp、1kb、2kb，分別load進下圖五個well中 並以此電場進行電泳，請問這五段DNA於跑完電泳後會如何分布在電泳膠片上 並說明理由。 ┼ ┌────────────────────┐ │ ┌─┐ ┌─┐ ┌─┐ ┌─┐ ┌─┐ │ │ └─┘ └─┘ └─┘ └─┘ └─┘ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ │ └────────────────────┘ ─ Ans:sample通電後會馬上往膠片上方跑並且跳海，故跑不出結果。 因為DNA帶負電，所以當通電後，DNA會從負極往正極跑造成跳海。 以上是這次的考試題目及答案 --

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