http://www.cdgdc.edu.cn/pgsh/download/06ybzy/qiaohong.htm 自交不親和性（Self-incompatibility、SI）是高等植物特有的一種自我識別機制。在配 子體自交不親和的茄科、玄參科和薔薇科植物中，已知S-RNases控制花柱的自交不親和性 ，但還沒有找到控制花粉自交不親和性的基因。在金魚草和薔薇科的幾個種的S位點都分 離到了一類F－box蛋白，其中我們分離到距離S－RNase最近的一個F-box基因AhSLF-S2。 為了研究AhSLF-S2的功能，我們通過酵母雙雜交和免疫共沉澱的方法證明AhSLF-S2和 S-RNase可以相互作用但沒有等位基因的特異性；在金魚草中，通過免疫共沉澱或 pull-down實驗證明AhSLF-S2可以和Ask1-like和Cul1-like蛋白，推測它們可能形成類似 Skp1/Cul或CDC53/F-box(SCF)復合體；通過體內和體外實驗發現花粉用26S蛋白小體的抑 制劑MG115和MG132處理後，親和授粉的花粉管生長受到抑制，但是對不親和授粉的花粉管 的生長幾乎沒有影響，表明ubiquitin/26S 蛋白小體可能參與了花粉的親和反應；通過免 疫印記檢測發現親和授粉後的花柱中的蛋白質泛素化水平隨時間的延長而增加，而不親和 授粉的花柱中蛋白質泛素化水平變化不大。通過免疫共沉澱實驗證明用親和花柱粗體液培 養的花粉中的核酸酶被泛素化，而用不親和花柱粗體液培養的花粉中的核酸酶不被泛素化 或被泛素化的水平低。在親和授粉的花柱中，核酸酶的表達水平在授粉36小時後明顯降低 ，提示在親和授粉中，AhSLF-S2可以與S-RNase作用，並且可能通過SCF AhSLF－S2復合體 降解S-RNase。為了進一步研究AhSLF-S2的功能，把含有AhSLF-S2和AhS2-RNase的可轉化 TAC克隆（TAC26）轉化到自交不親和的矮牽牛（Petunia hybrida）中。通過對T0代進行 Southern及 RT-PCR和免疫印記檢測證明AhSLF-S2和S2-RNase在矮牽牛中分別在花粉中和 花柱中正常表達。T0代授粉實驗發現AhSLF-S2正確表達的轉基因植株的花粉產生自交親和 現象。對T1代植株進行Southern檢測證明AhSLF-S2和S2-RNase在轉基因矮牽牛中穩定遺傳 ；通過RT-PCR和免疫印記檢測證明它們分別在矮牽牛的花粉中和花柱中正常表達；同樣進 行授粉實驗，證明花粉的自交不親和性被轉基因改變並可以遺傳，因此推測AhSLF-S2控制 了花粉的自交不親和性。 關鍵詞：S 位點 F-box蛋白 金魚草 自交不親和性 S－RNase 花粉S基因 泛素化 矮牽牛 -- 人類之所以偉大，正在於他是一座橋樑而非目的； 人類之所以可愛，正在於他是一段跨越與完成。 --

※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 124.8.129.253