http://www.cdgdc.edu.cn/pgsh/download/06ybzy/qiaohong.htm 自交不亲和性（Self-incompatibility、SI）是高等植物特有的一种自我识别机制。在配 子体自交不亲和的茄科、玄参科和蔷薇科植物中，已知S-RNases控制花柱的自交不亲和性 ，但还没有找到控制花粉自交不亲和性的基因。在金鱼草和蔷薇科的几个种的S位点都分 离到了一类F－box蛋白，其中我们分离到距离S－RNase最近的一个F-box基因AhSLF-S2。 为了研究AhSLF-S2的功能，我们通过酵母双杂交和免疫共沉淀的方法证明AhSLF-S2和 S-RNase可以相互作用但没有等位基因的特异性；在金鱼草中，通过免疫共沉淀或 pull-down实验证明AhSLF-S2可以和Ask1-like和Cul1-like蛋白，推测它们可能形成类似 Skp1/Cul或CDC53/F-box(SCF)复合体；通过体内和体外实验发现花粉用26S蛋白小体的抑 制剂MG115和MG132处理後，亲和授粉的花粉管生长受到抑制，但是对不亲和授粉的花粉管 的生长几乎没有影响，表明ubiquitin/26S 蛋白小体可能参与了花粉的亲和反应；通过免 疫印记检测发现亲和授粉後的花柱中的蛋白质泛素化水平随时间的延长而增加，而不亲和 授粉的花柱中蛋白质泛素化水平变化不大。通过免疫共沉淀实验证明用亲和花柱粗体液培 养的花粉中的核酸酶被泛素化，而用不亲和花柱粗体液培养的花粉中的核酸酶不被泛素化 或被泛素化的水平低。在亲和授粉的花柱中，核酸酶的表达水平在授粉36小时後明显降低 ，提示在亲和授粉中，AhSLF-S2可以与S-RNase作用，并且可能通过SCF AhSLF－S2复合体 降解S-RNase。为了进一步研究AhSLF-S2的功能，把含有AhSLF-S2和AhS2-RNase的可转化 TAC克隆（TAC26）转化到自交不亲和的矮牵牛（Petunia hybrida）中。通过对T0代进行 Southern及 RT-PCR和免疫印记检测证明AhSLF-S2和S2-RNase在矮牵牛中分别在花粉中和 花柱中正常表达。T0代授粉实验发现AhSLF-S2正确表达的转基因植株的花粉产生自交亲和 现象。对T1代植株进行Southern检测证明AhSLF-S2和S2-RNase在转基因矮牵牛中稳定遗传 ；通过RT-PCR和免疫印记检测证明它们分别在矮牵牛的花粉中和花柱中正常表达；同样进 行授粉实验，证明花粉的自交不亲和性被转基因改变并可以遗传，因此推测AhSLF-S2控制 了花粉的自交不亲和性。 关键词：S 位点 F-box蛋白 金鱼草 自交不亲和性 S－RNase 花粉S基因 泛素化 矮牵牛 -- 人类之所以伟大，正在於他是一座桥梁而非目的； 人类之所以可爱，正在於他是一段跨越与完成。 --

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